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新型染料羧基荧光素乙酰乙酸[5-(and-6)-carboxyfluresceindiacetate,succinimidylester,CFDA-SE]与眼底照相,光学相关断层扫描(OCT)及免疫组化方法相结合在视网膜色素上皮细胞(retinalpigmentepitheliumcells,RPECs)移植中的应用研究。
方法用CFDA-SE(10μmol/L)标记供体RPECs,37℃下孵育1mim,通过玻璃体视网膜显微手术将细胞悬液植入同种异体青紫蓝兔视网膜下腔,术后用眼底照相,OCT等追踪观察并分别在30d和60d时处死实验兔,荧光显微镜下观察标记的供体细胞,同时作紧密连接的结构蛋白ZO-1和细胞骨架蛋白Actin的免疫组化分析。
结果:荧光显微镜下观察到标记的供体RPECs可嵌插于宿主RPECs之间,铺成单层结构,并形成新的细胞间紧密连接(tightjunctions,TJs),ZO-1,Actin的免疫组化结果经统计分析表明与原位RPECs之间的表达无显著差异(ZO-1:|t|=2.05,P<0.05;Actin:|t|=2.14,P<0.05)。
结论CFDA-SE是一种快捷、稳定、安全的活体细胞染料,可作为理想的标记物应用于RPECs移植中。