黄瓜品系C-8植株再生体系及遗传转化体系的建立

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以黄瓜抗逆品系C-8的子叶节为外植体,比较不同种类的激素组合,如6-BA+NAA、6-BA+IAA、KT+IAA、TDZ+IBA等,以及同种激素组合的不同浓度配比对不定芽的诱导效果,其中6-BA+IAA的组合效果较好。在此基础上探讨了不同浓度的6-BA和IAA的配合,以及加入AgNO3时对不定芽的诱导率、再生植株质量的影响情况。获得的主要结果有:在诱芽培养基MS+0.5mg/L6-BA+2mg/LIAA+Sucrose25g/L+Agar7g/L中培养35d后,其不定芽诱导率达77.5%。添加不同浓度(1.0mg/L,2.0mg/L)的AgNO3对不定芽诱导率的影响不大。再生苗的生根培养基为1/2MS,移栽至大田能正常开花结果。而其他浓度的6-BA和IAA组合虽然有的不定芽的诱导率高达90%,但再生植株质量不好,可能与高浓度的6-BA有关。  在建立高效优质的C-8黄瓜再生体系的基础上,开展了遗传转化研究。将抗虫基因--半夏凝集素基因(PTA)构建到中间载体pWMB014上,并对黄瓜子叶节进行了农杆菌(LBA4404)介导的遗传转化体系研究,探讨了不同的遗传转化条件,如不同的侵染条件、除菌条件、筛选条件,以及加入乙酰丁香酮对转化效果的影响等。获得的主要结果有:除菌培养基以0.5mg/L 6-BA+2mg/L IAA+Sucrose 25g/L+Agar 7g/L+PPT 0.6mg/L+Cef400mg/L为好。在除菌过程中易出现农杆菌复发的情况,因此在侵染过程中可适当降低菌液OD值和缩短侵染时间,或提高抗生素浓度。此外乙酰丁香酮浓度为100μm/L时对侵染后再生率的提高有促进作用。选择培养基以0.5mg/L 6-BA+2mg/L IAA+Sucrose 25g/L+Agar 7g/L+PPT0.6mg/L+Cef 400mg/L较理想,适宜的生根培养基为1/2MS+PPT 0.6mg/L+Cef 400mg/L。PCR和RT-PCR结果表明外源基因已整合到黄瓜基因组中。  采用花粉管通道法进行了抗旱转录因子AhNAC3转入黄瓜的研究。比较了切割柱头、子房注射和子房涂抹3种花粉管通道法处理授粉后黄瓜子房的转化效果,获得的主要结果表明子房注射可成功获得黄瓜转基因植株。PCR证明外源基因已整合到黄瓜基因组中。
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