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目的:岭南地区具有高温多湿多雨的气候特点,岭南人脾胃偏弱嗜食海鲜白酒。中医湿热证多因外湿、内湿合而为病,岭南湿热证恰好符合中医湿热证的病因病机特点。肠道微生态改变与中医湿热证有着类似的症状,中医湿热证的肠道微环境改变所造成的病理状态的机制尚未明确。本实验旨在建立岭南湿热模型,探讨湿热病理状态下肠道微生物群和肠道黏膜免疫屏障的变化及益生菌、茵陈、连翘对湿热证的作用。方法:采用“外湿热+内湿热+劳伤”复因素造模法,建立岭南湿热证小鼠模型:全封闭式自动调温调湿人工气候箱提高温度和湿度,[T:(30±0.15)℃,HR:80%-85%]每天12h,模拟岭南特有湿热外环境;“高蛋白饲料+隔日灌服白酒0.3ml”模拟内湿热因素;每日跑步30min模拟劳伤之脾虚因素。造模完成后分别用益生菌、茵陈、连翘灌服7日,同时对照组用超纯水灌服7日。观察正常组、模型组及药物组小鼠每日的症状、体征,测量小鼠每周体重;对小鼠舌根部和结肠组织进行病理切片和HE染色;免疫组化法检测小鼠结肠肠组织中LPS、Muc2和AQP1的表达;结肠肠组织杯状细胞PAS染色,潘氏细胞荧光桃红柠檬黄染色;结肠肠组织抗微生物肽Global-def、Crypt、CRS4C实时荧光相对定量PCR检测;血清TNF-α、IFN-γ、IL-6、LPS浓度酶联免疫吸附试验(ELISA)检测;16s rRNA检测小鼠肠道菌群。成果:模型组小鼠出现典型的湿热证症状:倦怠嗜卧、饮食量减少、毛发黏腻、小便短黄、大便黏滞不爽。舌组织病理HE染色显示黏膜层角化增加伴过角质化突起,固有层炎症伴结缔组织损伤;结肠组织病理HE染色显示腺体损伤。结肠组织杯状细胞染色和Muc2免疫组化结果提示肠道杯状细胞和黏液向肠隐窝集中和增加;潘氏细胞染色和抗微生物肽的PCR结果提示肠道微生物群发生紊乱以及肠道有害菌的增加;结肠组织AQP1表达量明显增加提示肠道水液蓄留。血清TNF-α、IFN-γ含量增加(P<0.001);血清LPS含量的明显升高(P<0.001)提示肠黏膜免疫屏障被破坏,肠道菌群发生移位。肠菌OTU数目增加,PCA图肠道菌群变化较大,提示湿热模型的小鼠肠道菌群数目增多,菌群的种类增加,肠道的微生物环境发生紊乱;厚壁菌中Bacilli、Ruminococcus 所占比例减少,Clostridia、Erysipelotrichi 所占比例增加;变形菌中Betaproteobacteria、Deltaproteobacteria所占比例增加;拟杆菌中Prevotella所占比例减少;TM7-3所占比例增加提示湿热模型小鼠处于不健康状态,湿热证的造模因素可以对机体产生消极作用。与模型组相比,(1)益生菌组小鼠病理状态明显改善,舌组织固有层组织结构完整,但黏膜层角化并未好转;结肠组织病理变化有明显改善;结肠组织潘氏细胞数量和抗微生物肽的表达量都有降低趋势;血清IFN-y含量减少(P<0.001),IL-6含量增加(P<0.05),LPS含量有减少趋势;肠道黏膜免疫屏障功能和肠道菌群有明显的改善。(2)茵陈组小鼠病理状态有所改善,舌组织固有层和肌层有好转趋势,结肠组织病理切片显示组织结构好转;结肠组织AQP1的表达量明显减少;血清炎症因子IFN-γ含量降低(P<0.01);肠道菌群TM7-3、Desulfovibrio、Escherichia含量增加。(3)连翘组小鼠病理性症状和体征都有所改善;舌和结肠组织病理切片显示组织结构好转,但是舌组织黏膜层角化没有减少;结肠组织AQP1的表达量没有明显减少;血清炎症因子TNF-α和IFN-γ的含量降低明显(TNF-α,P<0.05;IFN-γ,PP<0.001),IL-6 的含量增加(P<0.05);肠道菌群没有明显好转。结论:根据中医湿热证模型的造模方法,岭南湿热证模型小鼠出现了典型的湿热证临床症状,提示造模成功。模型小鼠出现了体重增长的缓慢,舌组织结构的损伤和黏膜层角化的增加,结肠组织结构的损伤,肠道微生物群的紊乱和肠道黏膜免疫屏障的破坏及肠道菌群移位等表现。益生菌对模型小鼠症状、体征及结肠组织的损伤有改善作用,尤其对肠道微生物群有积极的调节作用,能改善肠道紊乱的菌群环境,并且对肠道黏膜免疫屏障的修复有积极作用,但是不能减少舌组织黏膜层的角化,这可能是因为益生菌的作用方面在肠道菌群,对于口腔的菌群没有显著的调节作用。中药茵陈和连翘对中医湿热证的作用主要在水液代谢和免疫炎症方面,对肠道微生物群没有明显的改善作用,但是对于模型小鼠机体的整体改善却是效果显著的,舌和结肠组织的病理结果也显示组织损伤得到了很好的恢复。这说明茵陈和连翘作为天然药物,能与自然界的生物达到很好的契合,它们的作用并不仅仅局限于某一点,而在于对生物体整体的调节,这与化合而成的益生菌的作用效果是不同的。