论文部分内容阅读
急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia，AML)是起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病。AML的发生是一个复杂的、多步骤的过程，目前认为“多次打击”学说是AML主要的发病机制。除了细胞遗传学改变外，表观遗传修饰异常也是AML发病的重要机制之一。其中抑癌基因启动子区域高甲基化是白血病发生的一种重要机制，与白血病细胞周期异常、增殖失控以及细胞周期蛋白异常表达或缺失相关。多项研究显示，几乎所有AML患者存在至少一种抑癌基因异常高甲基化，约75％的AML患者存在至少两种基因异常高甲基化。所以应用DNA去甲基化药物是治疗AML的重要方式之一。 地西他滨(Decitabine，DAC)是一种常用的去甲基化药物，可以通过掺入DNA，抑制DNA甲基转移酶，而重新激活那些由于DNA过度甲基化而失活的基因。地西他滨抑制DNA甲基化的活性是5-氮杂胞苷的30倍。临床研究发现，每天20mg/m2的地西他滨方案和小剂量阿糖胞苷方案相比，地西他滨组的完全缓解(CR)率为17.8％，对照组为7.8％，地西他滨组总生存率(OS)获益具有统计学意义。2012年，欧洲药品管理局(EMEA)批准地西他滨用于大于65岁AML患者的一线治疗。 研究目的:研究去甲基化药物地西他滨对急性髓系白血病细胞增殖、凋亡、分化、周期的调控作用，并探讨其机理，为临床上应用去甲基化药物治疗白血病提供理论依据。 研究方法:通过CCK-8(Cell Counting Kit-8)、流式细胞术、吉姆萨染色等方法检测地西他滨对于AML细胞系在增殖、凋亡、分化等方面的影响。通过Western-blot方法检测地西他滨处理前后AML细胞系蛋白表达量的变化。通过双荧光素酶报告基因技术检测miRNA148a启动子区AML1-ETO融合蛋白的作用位点。 研究结果:1.地西他滨可以特异性地抑制AML1-ETO阳性细胞系的增殖。2.低浓度地西他滨可诱导AML细胞系凋亡，但不表现AML1-ETO特异性。3.低浓度地西他滨处理后，AML1-ETO阳性细胞系被特异性地阻滞于G1期。4.低浓度地西他滨处理后，AML1-ETO阳性细胞系CD11b的表达量较AML1-ETO阴性细胞系明显增高;吉姆萨染色显示地西他滨处理后，AML1-ETO阳性细胞系核质比更低、向髓系分化更明显。5.低浓度地西他滨特异性地抑制AML1-ETO阳性细胞系DNMT1蛋白、AML1-ETO融合蛋白和c-kit蛋白的表达量，且c-kit蛋白低水平表达可持续至处理后24天左右，30天之后蛋白表达量回升。6.AML1-ETO融合蛋白可通过结合至靶基因microRNA148a的启动子区抑制miRNA148a的表达。 研究结论:低浓度地西他滨可以特异性地调控AML1-ETO阳性细胞系生物学功能，特异性地抑制其增殖、诱导其向髓系分化、影响其周期分布、抑制其DNMT1蛋白、AML1-ETO融合蛋白和c-kit蛋白的表达量。这提示我们低浓度地西他滨可能会成为一种新的靶向治疗t(8;21)急性髓系白血病的方法。