PD-L1单克隆抗体联合树突状细胞治疗人结肠癌的实验研究

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近年来,免疫治疗成为抗肿瘤研究的热点。其中,程序性死亡配体-1(programmed death-ligand1,PD-L1)的单克隆抗体作为免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors)已被应用于多种肿瘤的临床治疗。然而,在多项临床试验中,静脉应用PD-L1单抗却只能使一部分患者受益。DC是目前已知的抗原递呈能力最强的细胞,在诱导CTL和T细胞活化方面起关键作用,如荷载肿瘤抗原的树突状细胞(dendritic cells,DC)疫苗、DC诱导的肿瘤特异性细胞毒性T细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)、DC诱导的活性T细胞等过继免疫治疗,已被证实是安全可行的并应用于临床。除肿瘤细胞外,在DC表面有PD-L1的大量表达,但关于PD-L1单抗与DC相关的研究却较少。应用PD-L1单抗能否制备出高效的DC疫苗,需进一步的探索。  目的:对比分析肿瘤患者与健康人DC的PD-L1表达情况。研究PD-L1单抗对DC及其诱导T细胞功能的影响,观察其对人结肠癌细胞的体外抗肿瘤作用,探索增强免疫能力的新疗法。  方法:1)用流式细胞仪分别检测肿瘤患者与健康人外周血DC亚群及培养成熟DC亚群的PD-L1表达情况。2)PD-L1单抗封闭DC,流式细胞仪检测DC表型,流式液相多重蛋白定量技术(cytometric beads array,CBA)检测DC上清中IL-10、IFN-γ、TNF-α的浓度。3)流式细胞仪检测PD-L1单抗封闭DC所诱导的T细胞表型,CBA法检测其上清中IL-10、IFN-γ、TNF-α的浓度。4)LDH释放法检测T细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。  结果:1)流式细胞术检测肿瘤患者与健康人外周血DC亚群及培养成熟DC亚群的表型:肿瘤患者外周血DC1亚群PD-L1的表达低于成熟的DC1亚群(p=0.032<0.05),健康人外周血DC1亚群PD-L1的表达低于成熟的DC1亚群(p=0.000<0.001);肿瘤患者外周血DC1亚群的PD-L1表达高于健康人(p=0.041<0.05),肿瘤患者成熟DC1亚群的PD-L1表达低于健康人(p=0.014<0.05)。2) PD-L1单抗组DC表达CD83高于对照组(p=0.03<0.05),分泌的TNF-α高于对照组(p=0.031<0.05),分泌IFN-γ高于对照组(对照组浓度为0)。3)PD-L1单抗组封闭DC诱导的CD8+T细胞高于对照组(p=0.04<0.05),上清中IFN-γ的浓度低于对照组(p=0.002<0.01)。4)在效靶比为5∶1与10∶1时,PD-L1单抗组均高于对照组(p=0.028<0.05,p=0.007<0.01)  结论:1)肿瘤患者与健康人外周血DC1亚群PD-L1表达高于健康人,成熟DC1亚群PD-L1的表达低于健康人。2)PD-L1单抗可提高DC成熟度,增强DC细胞因子分泌功能。3)PD-L1单抗能提高DC疫苗诱导细胞毒性T细胞的能力,其诱导的T细胞对肿瘤细胞杀伤活性高。4)PD-L1单抗能制备出高效的DC疫苗。
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