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目的: 1.筛选、鉴定沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，Ct)主要外膜蛋白(Major OuterMembrane Protein，MOMP)B、CTL细胞表位，选择富含B表位和CTL表位的肽段为重叠表位疫苗研究提供理论依据。 2.合成酵母密码子优化的乙肝表面抗原(Hepatitis B virus surface antigen，HBsAg)基因，构建PPIC9K/HBsAg△重组质粒(HBsAg△表示酵母优化的HBsAg)，作为呈递B、CTL细胞重叠表位的载体。 3.构建Ct重叠表位的PPIC9K/HBsAg△/Ct MOMP重组质粒，并通过酵母表达系统表达该融合蛋白，为后续的免疫效应研究奠定基础。 方法: 1.以E型Ct标准株MOMP的完整氨基酸序列为基础，应用在线预测网站SYFPEITHI(http://www.syfpeithi.de/)，预测MOMP的HLA-A*0201限制性CTL表位，选择分值较高的肽段，采用肽亲和实验、胞内细胞因子检测及细胞毒实验分析预测所得CTL表位。结合本实验室已经报道的B细胞表位[1-2]，综合分析后选择同时含B细胞表位及CTL细胞表位的肽段作为重叠表位的候选区。 2.采用酵母密码子优化策略，通过不对称PCR方法得到HBsAg片段，并克隆至酵母表达载体PPIC9K中，获得PPIC9K/HBsAg△重组质粒，同时利用PCR从乙肝患者血清中扩出HBsAg（野生型）作为对照。构建的PPIC9K/ HBsAg重组质粒（包括密码子优化和野生型的HBsAg）经PCR、酶切和测序分析鉴定。 3.将Ct MOMP重叠表位克隆入PPIC9K/HBsAg△重组质粒，构建成嵌合重组质粒PPIC9K/HBsAg△/MOMP重叠表位，并PCR、酶切和测序分析鉴定。目前，正在进行电转毕赤酵母GS115，经G418和组氨酸(His)筛选高拷贝菌株，甲醇诱导重组蛋白的表达，并拟采用SDS-PAGE电泳和Western blot分析鉴定，及通过电镜观察HBsAg△/MOMP重叠表位病毒样颗粒(Virus-like particles，VLP)的形成。 结果: 1.CTL表位的预测结合肽亲和实验、胞内细胞因子检测及细胞毒实验鉴定结果，MOMP第73～81区段、第160～169区段、第217～225和第378～387区段为抗原特异性、MHC限制性杀伤的CTL表位。结合本实验室已经报道的B细胞表位[1-2]，故选择第217～225和第378～387区段作为目的研究片段。 2.通过不对称PCR获得了HBsAg△片段，成功构建了酵母表达质粒PPIC9K/HBsAg△，并从血清中扩出HBsAg野生型片段，成功构建了PPIC9K/HBsAg（野生型）对照质粒。 3.构建了HBsAg△/MOMP嵌合基因，并成功克隆到酵母表达质粒PPIC9K中，构建了两个含有Ct MOMP重叠表位的酵母表达质粒PPIC9K/HBsAg△/MOMP217-225，PPIC9K/HBsAg△/MOMP378-387。并转化酵母GS115，重组子鉴定显示转化成功。 结论: 1.经预测鉴定筛选了两个较好的Ct MOMP重叠表位。 2.通过分子克隆成功构建了PPIC9K/HBsAg△和PPIC9K/HBsAg（野生型）两个酵母表达质粒。 3.通过分子克隆成功构建了2个含重叠表位的重组质粒PPIC9K/HBsAg△/MOMP217-225和PPIC9K/HBsAg△/MOMP378-387，并转化酵母GS115中进行表达。