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研究背景及目的：慢性肾脏疾病（Chronic kidney disease,CKD)是严重危害人类健康的常见病和多发病，在其病情进展的过程中，高血压毫无疑问是最重要的危险因素之一。大量研究证实肾脏纤维化是各种慢性肾脏疾病进展至终末期肾衰竭（End-stagerenal disease,ESRD)的共同通路及主要的病理基础。 已有大量研究证实肾素-血管紧张素-醛固酮系统( Renin-angiotensin-aldosterone system，RAS)通过对炎症因子及其他因素的调节在CKD的发病及病情进展中发挥了重要作用加速了肾间质纤维化的进展。PI3K家族具有磷脂酰肌醇激酶和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的双重活性，是细胞内的重要信号传导通路之一。PI3K家族共分为3型，而PI3Kγ是属于IB类亚单位中的一员。既往的研究结果和文献报道，在血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ, AngⅡ)诱导的小鼠高血压模型中，阻断PI3Kγ信号通路起到了明显的保护作用。本研究拟在AngⅡ诱导的小鼠肾纤维化模型中，使用特异性抑制剂AS605240阻断PI3Kγ信号通路期望有助于抑制肾组织炎症因子的聚集、成纤维细胞的增殖和激活等，进而达到防治肾脏纤维化的目的。 方法： 1.体内实验：(1)用单侧肾切除法（Uninephrectomy，UNX)构建C57BL/6J小鼠髙血压肾损伤模型。（2)将小鼠分为三组，分别为手术对照组，UNX+AngⅡ模型组以及UNX+AngⅡ+AS605240干预组。按说明书操作将AngⅡ灌入动物微量给药渗透压泵中并将该泵置于模型组及干预组小鼠背部皮下。造模结束24小时后开始给予UNX+AngⅡ+AS605240干预组小鼠50mg/kg/d剂量的AS605240灌胃，其余小鼠给予等体积的生理盐水。（3)连续灌胃4周后，处死全部小鼠留取血液及肾脏标本。血液标本用于BUN和Scr的测试。部分肾脏组织用于制作石蜡切片，其余部分用于实时荧光定量PCR和Western blot检测。(4)用H E染色法观察小鼠肾脏受损情况，用Masson染色及Sirius Red染色观察肾间质胶原纤维沉积状况，用IH C法观测细胞外基质的主要组成成分Fibronectin、CollagenI以及肌成纤维细胞标志物α-SMA的表达情况。阳性指标面积的统计用ImageProPlus6.0软件进行，先计算阳性指标面积占肾组织横截面积的比例，再用SPSS12.0软件对数据进行分析。（5)用WB方法检测小鼠肾组织Fibronectin、CollagenⅠ、α-SMA的蛋白表达情况，用PCR检测IL-1β、IL-6、TGF-β1、TNF-α的mRNA表达量并用SPSS12.0软件进行统计分析。 2.体外实验：（1)用结晶紫染色及读数测试AngⅡ和AS605240干预NIH-3T3细胞适宜的浓度。（2) AngⅡ和AS605240处理NIH-3T3细胞0、24、48小时后，用结晶紫染色和读数检测细胞增殖情况。（3) AngⅡ和AS605240处理NIH-3T3细胞48小时后，运用实时荧光定量PCR检测Fibronectin、Colla、a-SMA、CTGF的mRNA表达情况。(4) AngⅡ和 AS605240处理NIH-3T3细胞48小时后，运用Western Blot法检测PI3K信号通路下游蛋白激酶B(Akt)及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的蛋白表达情况。 结果： 1.体内实验：（1)血清生化分析：AngⅡ模型组小鼠外周血BUN、Scr水平明显升髙，AngⅡ+AS605240干预组小鼠外周血BUN、Scr水平较模型组明显降低。（2)小鼠肾脏取材组织学检测结果：HE染色可见模型组小鼠部分肾小球体积增大，肾小球基底膜增厚，毛细血管受压,局部肾小球囊壁粘连，肾小管扩张明显，肾间质区可见纤维组织增生。Masson染色提示模型组小鼠肾间质蓝染区主要为胶原纤维成分，而干预组小鼠肾间质蓝染区明显减少，但仍高于对照组。Sirius Red染色显示模型组小鼠肾间质红色区域主要为胶原纤维成分，干预组小鼠肾间质红色区域面积显著减少。IHC法提示AngⅡ模型组小鼠肾脏Fibronectin、CollagenⅠ、α-SMA的表达量明显高于对照组及AS605240干预组小鼠。（3)小鼠肾脏取材其他检测结果：PCR显示模型组小鼠肾脏组织炎症趋化因子IL-1β、IL-6, TGF-β1、TNF-α的表达量明显高于其他两组；Western Blot提示AS605240能有效降低Fibronectin、CollagenⅠ、α-SMA在小鼠肾脏的表达水平。 2.体外实验：（1)细胞增殖实验：AngⅡ干预细胞0、24、48小时后，结晶紫染色和读数提示AngⅡ能促进成纤维细胞增殖。AngⅡ+AS605240联合处理细胞后，结晶紫染色和读数提示AS605240明显减缓了细胞的生长。（2) PCR结果显示AngⅡ干预细胞48小时后， Fibronectin、Colla、α-SMA、CTGF的mRNA表达水平明显高于DMSO对照组及AngⅡ+AS605240联合处理组。（3) Western Blot结果显示，AngⅡ能有效激活蛋白激酶B，使其磷酸化，而Ang II+AS605240联合干预细胞后，磷酸化蛋白激酶B的蛋白表达量明显减少。 结论： 1. AngⅡ的持续泵入能加速单侧肾切除小鼠的肾损伤进展，使BUN、Scr明显升高，AS605240的治疗则能有效减轻由AngⅡ造成的肾功能障碍。 2.在组织学上，AngⅡ+AS605240干预组小鼠肾损伤的程度明显轻于AngⅡ模型组，但仍髙于对照组。另外，Ang Ⅱ模型组小鼠肾间质可见明显胶原沉积，Fibronectin、Colla、α-SM A的蛋白表达量显著髙于其他两组。 3. AngⅡ可使炎症趋化因子在肾脏的表达增加，AS605240则能减少炎症趋化因子的累积。 4.成纤维细胞在AngⅡ的影响下能明显增殖且活化为肌成纤维细胞，而AS605240则抑制了成纤维细胞的活化并减缓其生长。 5.成纤维细胞经过AngⅡ+AS605240联合处理后，肾纤维化相关细胞因子Fibronectin、Colla, CTGF的表达量较AngⅡ干预组明显降低。 6. AS605240能有效减少蛋白激酶B的磷酸化，从而减缓了成纤维细胞的增殖。