论文部分内容阅读
目的通过吸入糖皮质激素（布地奈德）干预哮喘大鼠，观察气道炎症，测定气道阻力、肺组织中TOLL样受体7（TLR7）的mRNA转录及蛋白表达，观察相关细胞因子IFN-γ、IL-12mRNA转录的变化情况，了解吸入性糖皮质激素对肺组织中TLR7受体的影响及相关细胞因子的变化。方法1.40只清洁健康，约1月龄，体重150-170克的雄性SD大鼠，随机分配为以下四个组别：正常对照组（Control组）、哮喘模型组（Model组）、地塞米松干预治疗组（Dexamethasone，DXM组），布地奈德混悬液干预治疗组（Budesonide，BUD组），每组各10只。2. Model组、DXM组、BUD组大鼠分别于实验第1天、第8天腹腔注射10﹪卵清蛋白(Ovalbumin，OVA)溶液1毫升，包含免疫佐剂氢氧化铝100毫克，实验第15天，用2﹪卵清蛋白溶液4毫升对大鼠进行雾化吸入激发，每天雾化1次，每次约为10分钟，连续14天。DXM组大鼠在雾化吸入激发前半小时，给予腹腔注射地塞米松注射液，剂量为0.5毫克/千克, BUD组给予2毫升（1mg）布地奈德混悬液雾化吸入。在致敏阶段与雾化激发阶段，Control组采用0.9%氯化钠代替卵清蛋白溶液进行腹腔注射与雾化吸入。3.实验第28天，四组大鼠分别予以水合氯醛腹腔注射麻醉后用肺功能检测气道阻力变化，检测完成后用腹主动脉放血方法处死大鼠，分别取各组左右两侧肺组织，其中左肺组织作实时荧光定量聚合酶连锁反应法（quantitative real-time PCR，qPCR）来检测肺组织TLR7、IL-12和IFN-γ mRNA的转录水平，并通过Western Blot检测方法检测大鼠肺组织中TLR7的蛋白表达水平；右侧肺组织通过病理HE染色方法对各组大鼠肺组织进行形态学观察，分析四组大鼠中气道炎症的变化情况。结果1．亚急性哮喘大鼠模型的建立：除Contol组外，其他三组大鼠随着激发次数的增加，开始出现烦躁不安、抓耳挠腮、食欲减退、脱毛、呼吸急促、反应迟钝等哮喘样表现；实验第28天进行气道反应性测定，显示Model组大鼠气道反应性有增高，与Control组比较具有统计学意义（P＜0.05）；结合HE染色肺组织切片的形态学检查显示，Model组气道周围大量炎症细胞增多，嗜酸性粒细胞增加，气道平滑肌增生，管腔内粘性分泌物明显增多，提示大鼠哮喘模型构建成功。2．BUD组病理组织学与气道阻力检测变化：经干预后的哮喘大鼠肺组织病理学显示，与Model组比较，BUD组气道炎性反应减轻，与DXM相类似。大鼠气道阻力测定，BUD组气道阻力在不同浓度盐酸组胺诱导下，其阻力值与Model组比较减低，差异具有统计学意义(P＜0.05)；与Control组比较增高，差异具有统计学意义(P＜0.05)；与DXM比较，差异无统计学意义。3．BUD组肺组织TLR7mRNA与TLR7蛋白表达量变化：哮喘大鼠Model组TLR7mRNA与蛋白的表达量均较Control组明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)；BUD组与DXM组TLR7mRNA及蛋白表达量同Model组比较均明显增高，差异具有统计学意义(P＜0.05)。BUD组与DXM组TLR7mRNA及蛋白表达量相比，差异无统计学意义。与Control组比较，明显低于Control组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。4. BUD组肺组织IFN-γ和IL-12的mRNA表达量变化：Model组IL-12mRNA与IFN-γmRNA表达量较Control组比较均明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)； BUD组、DXM组表达量较Model组比较，IL-12和IFN-γ的mRNA的表达量均显著增高，差异具有统计学意义(P＜0.05)；但仍低于Control组(P＜0.05)；BUD组与DXM组相比差异无统计学意义。结论1.卵清蛋白致敏与激发成功构建亚急性哮喘大鼠模型。吸入性糖皮质激素（布地奈德）能减轻气道炎症与降低气道高反应性。2.布地奈德干预治疗哮喘大鼠后能上调肺组织TLR7mRNA转录水平与TLR7蛋白的表达。3.布地奈德干预治疗哮喘大鼠后能够上调IL-12及IFN-γ mRNA转录水平。