【摘 要】
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目的：本研究通过观察青年与老年大鼠缺血再灌注及缺血预适应心肌多胺代谢、心肌损伤、心肌抗炎、抗氧化能力的变化及外源性多胺对其的影响，探讨外源性多胺恢复老龄大鼠缺血预适
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目的：本研究通过观察青年与老年大鼠缺血再灌注及缺血预适应心肌多胺代谢、心肌损伤、心肌抗炎、抗氧化能力的变化及外源性多胺对其的影响，探讨外源性多胺恢复老龄大鼠缺血预适应心肌保护作用的能力并探讨其机制。 方法：取青年(3月龄)与老年(18月龄)Wistar大鼠应用离体心脏灌流方法复制心肌缺血再灌注与缺血预适应模型，实验分为6组，青年缺血再灌注组(Y-IR)、青年缺血预适应组(Y-IPC)、老年缺血再灌注组(O-IR)、老年缺血预适应组(O-IPC)、多胺处理组(PAs-O-IPC)、多胺÷抑制剂组(PAs-I-O-IPC)。应用高效液相色谱(HPLC)测定心肌多胺含量；液体闪烁计数方法测定多胺合成代谢限速酶ODC与分解代谢限速酶SSAT的活性；比色法测定冠脉流出液中LDH活性及心肌组织中SOD活力、MDA含量；多导生物信号记录仪测定心脏血流动力学参数；电镜观察心肌超微结构变化；酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠心肌组织中TNF-α、IL-1β含量。应用D-半乳糖诱导原代培养的乳鼠心肌细胞衰老，建立衰老的心肌细胞模型。实验分为①正常对照组(Control)，②D-半乳糖诱导细胞衰老组(D-gal)，③不同浓度的精胺给药组(1μmol/L，10μmol/L，100μmol/L的Spermine)。β-半乳糖苷酶染色鉴定细胞衰老，超氧化物阴离子(Dihydroethidium，DHE)荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)的产生。结果1.①与青年缺血再灌注组(Y-IR)比，青年缺血预适应组(Y-IPC)心肌精脒、精胺含量增加；冠脉流出液中LDH，心肌组织SOD、MDA、TNF-α及IL-1β检测、心脏功能检测及心肌超微结构观察结果提示，Y-IPC组心肌损伤明显减轻，心肌抗炎、抗氧化能力增强。②与老年缺血再灌注组(O-IR)比较，老年缺血预适应组(O-IPC)心肌多胺代谢、心肌损伤、心肌抗炎抗氧化能力均未见明显改变。③与青年缺血预适应组(Y-IPC)比较，老年缺血预适应组(O-IPC)心肌多胺合成代谢下调(ODC活性降低)，多胺分解代谢上调(SSAT活性增加)，心肌精脒、精胺水平降低；O-IPC组心脏功能下降(LVDP与±dp/dt均明显降低)，电镜下可见心肌肌丝排列紊乱，线粒体基质疏松，大量脂褐素颗粒沉积；O-IPC组心肌抗炎、抗氧化能力明显下降(SOD活性降低，MDA、TNF-α及IL-1β水平增加)。④与老年缺血预适应组(O-IPC)比较，多胺处理组(PAs-O-IPC)心肌组织中精脒、精胺含量升高；冠脉流出液中LDH活性降低；心肌组织中SOD活力升高，MDA、TNF-α及IL-1β水平显著降低；PAs-O-IPC组心脏功能有明显改善(LVDP与±dp/dt均明显升高)；电镜观察可见PAs-O-IPC组心肌细胞肌节结构清晰，线粒体基质较致密、嵴排列较整齐。⑤与多胺处理组(PAs-O-IPC)比较，多胺+抑制剂组(PAs-I-O-IPC)取消了外源性多胺的以上作用。2.细胞部分的实验结果显示：D-半乳糖诱导细胞衰老组(D-gal)β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数明显高于对照组(Control)，DHE荧光强度增强(ROS产生增加)；1μmol/L与10μmol/L的外源性精胺均能明显降低β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数及衰老细胞内ROS生成。 结论：①缺血预适应处理(IPC)能够保护青年大鼠心肌的缺血再灌注(IR)损伤，抑制IR引起的心肌多胺水平下降。②老年大鼠IPC心肌多胺合成减少且对缺血预适应刺激减敏；外源性多胺在恢复老龄心肌多胺池的同时也恢复了老龄心肌对缺血预适应刺激的敏感性，其机制可能与多胺增强老龄心肌抗炎、抗氧化作用有关。
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