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目的:研究透明质酸钠(SH)在角膜保存中的作用,探讨其在短期和中期角膜保存中对角膜内皮细胞结构和功能的影响,以期改进角膜保存的方法和提高保存角膜的质量。方法:(1)短期保存:新西兰大白兔新鲜眼球分三组:⑴A组:抽空房水同时前房内注入1% SH 0.25ml ;⑵B组:前房不作处理;⑶C组:抽空房水同时前房内注入过滤空气 0.25ml。三组眼球均放入湿房容器密封4℃保存。分别于保存前,保存后24、48、72、96 h对角膜行大体形态和裂隙灯显微镜观察,活体内皮显微镜检查,苔盼兰-茜素红染色检测角膜内皮细胞活性。(2)中期保存:自制改良中期保存液MMK(参考M-K液配方),在此基础上,加入SH,制成保存液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(为实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组:SH浓度分别为0.05%、0.03%、0.01%),于4℃下保存新西兰大白兔角膜,以未加SH的MMK液作对照并作组间对照。于保存3、5、7、10 d,30-34℃ 2h复温后,行苔盼兰-茜素红染色检测角膜内皮细胞活性,酶组织化学染色检测SDH、G-6-P酶活性,TEM和SEM观察角膜内皮细胞超微结构变化。结果:(1)短期保存:保存后24h:A组角膜表面光滑,透明度高,<WP=6>无水肿增厚,后弹力层无皱褶,B组角膜轻度水肿增厚,后弹力层出现皱褶48h:A组角膜仍很透明,无水肿增厚,后弹力层无皱褶,角膜内皮细胞形态好数量多,而B组眼球变软,前房变浅,角膜明显混浊水肿,后弹力层皱褶多,角膜内皮细胞明显减少并有较多黑区,与A组比较有显著性差异(P<0.01)。72、96h:A组角膜仍透明,仅轻微水肿(96h),后弹力层无明显皱褶,角膜内皮细胞数量较多形态较好,而B组眼球明显变软甚至塌陷,角膜严重混浊水肿,前房看不清,内皮镜检查成像不清,已不能计数。C组在保存过程中,24、48h角膜外观较透明,无明显水肿,但作角膜内皮镜检查时,因气泡使反光过强,多无法成像,内皮细胞不能计数。三组保存1、2、3、4 d角膜内皮细胞苔盼兰-茜素红染色活性细胞百分率比较,以A组最好,C组次之,B组最差,统计学处理有显著性差异(P<0.01),各时间点比较也有显著性差异(P<0.01)。(2)中期保存:加入SH的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,在保存的第3天时,角膜均透明无水肿增厚,而对照组则出现轻微水肿,第5、7天时,实验组可见轻度水肿,而对照组则明显水肿增厚,角膜透明度差。实验Ⅰ组(0.05%SH)与同期各组比较,其角膜片的透明度最好,水肿最轻。角膜内皮细胞苔盼兰-茜素红联合染色活性细胞百分率比较,实验Ⅰ组最高,未加SH的对照组最低,实验Ⅰ组亦好于Ⅱ、Ⅲ组,各组间比较有显著性差异(P<0.01);SDH和G-6-P酶染色平均透光密度值比较,各组间也有显著性差异(P<0.01);随着保存时间的延长,内皮细胞活性逐渐下降,<WP=7>各时间点比较有显著性差异(P<0.01)。TEM和SEM观察实验Ⅰ组和对照组保存3、5、7d的角膜细胞的超微结构,其形态和亚细胞结构完整性变化均有明显差别。结论:SH在角膜保存中,对角膜内皮细胞可起到明显的保护和稳定作用,SH用于角膜短期和中期保存,可显著提高保存角膜的质量,延长保存时间,中期保存的作用与SH在保存液中的浓度有关