真菌Box C/D snoRNA基因簇的鉴定与比较分析

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非编码RNA是指生物体内不编码蛋白质的RNA分子。非编码RNA种类繁多,具有广泛的生物学功能。snoRNA,即核仁小分子RNA是目前已知的非编码RNA中最丰富的一种。除了参与rRNA前体的剪切加工之外,snoRNA主要作用是指导rRNA上特定位点的2’—O—核糖甲基化以及假尿嘧啶化修饰。snoRNA在结构、功能以及基因组织等多方面存在着多样性,因此对snoRNA的研究有利于加深对非编码RNA的认识。 snoRNA的基因组织形式呈现丰富的多样性,而snoRNA基因簇是一种广泛存在的组织形式,其中酿酒酵母和裂殖酵母存在5个保守的box C/D snoRNA基因簇。酿酒酵母中的5个基因簇是独立转录的多顺反子基因簇,而裂殖酵母则是由内含子和外显子共同编码的基因簇。本文利用粗糙脉胞菌中获得的snoRNA实验数据,鉴定出6个box C/D snoRNA基因簇;然后在粗糙脉胞菌的数据基础上通过Blast搜索真菌基因组库,在15个多细胞真菌基因组中鉴定出了5个跟粗糙脉胞菌同源的基因簇(簇Ⅵ除外),表明这5个基因簇在真菌中普遍存在的,也暗示了这5个基因簇具有古老的起源,可能在真菌分化之前就已经存在。 将同源搜索鉴定出不同菌种的box C/D snoRNA基因簇进行比较分析发现5个基因簇的snoRNA基因的组织也呈现出丰富的多样性。其中基因簇Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ的snoRNA基因在分子组成以及排列顺序上都非常保守。基因簇Ⅲ的变化较大,既发现存在snoRNA基因(snR17)的缺失,同时也有新snoRNA基因的获得。基因簇Ⅴ则并不是在所有真菌中都存在,尽管在曲霉属各个基因组中能搜索出与基因簇Ⅴ(snR16-snR37)同源的snoRNA基因,但它们在基因组上的位置并不成簇,此外snR37基因还发现两个拷贝的存在。 对snoRNA基因的比较分析发现不同菌种中基因簇Ⅰ的snR24的功能区序列存在一个碱基的差异。其中粗糙脉胞菌中snR24的功能区能与rRNA完全配对,而在大部分真菌中该功能区与rRNA配对时会出现不配对的一个腺嘌呤(A),因此推测在作用过程中可能会形成一个碱基突出的“bulge”。而基因簇Ⅳ中的snR11,在不同菌种中表现出box元件以及功能区的突变。 此外,还对某些具有特定功能的snoRNA进行了同源检索,如指导U2-Am31的snR29,属于孤儿snoRNA的snR55。snR29整个分子的序列并不保守,在搜索过程则要采取宿主基因的同源搜索方式来进行,但是序列比对发现snR29指导U2-Am31的功能区序列非常保守;snR55尽管长度较长,但在序列上就具有很高的保守性,功能则有待进一步研究。 通过对真菌box C/D snoRNA基因簇全面系统的研究,获得大量真菌snoRNA基因簇的数据,也深入地研究了真菌snoRNA基因簇的基因组织、表达模式、基因起源与进化。研究成果丰富了snoRNA基因簇的认识,为进一步阐明snoRNA基因簇的起源与进化提供了依据,也为非编码RNA的基因组织形式的研究提供启示.
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