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水稻花药培养是当今生物技术中较为成熟、实用、有效的育种技术。利用花药培养对光温敏核不育材料进行培养可快速获得稳定、纯合的新光温敏核不育材料,关于这方面已有不少报道。然而利用空间诱变与花药培养技术相结合的途径获得新的光温敏核不育材料的研究还未见报道。本研究在前人研究的基础上,系统分析影响培矮64S空间诱变SP2代材料花药培养过程中的几个重要因素的作用,以探讨提高培矮64S花药培养效率的方法和途径,并从中筛选出部分高花药培养力的突变株系,从而为获得新的光温敏核不育系材料打下基础。主要结果如下:
1、对培矮64S与其它基因型水稻材料进行花药培养比较研究的结果表明,材料的基因型对花药培养力有显著影响,其中02428的花药培养力最高,培矮64S居中,航恢七号最低。
2、对培矮64S SP2代进行花药培养研究,结果表明利用空间诱变技术可以筛选出一些花药培养力较好的材料,其中诱导率较高的有H17、H12、H11、H4、H14、H5、H8、H16、H1等十个材料,绿苗分化率较高的有H17、H11、H14、H19、H13、H7、H8等七个材料。总的来说,H17、H11、H14、H6为较适合于花药培养的光温敏核不育系水稻材料。
3、对培矮64S SP2代材料进行培养条件的优化研究结果表明,N6和M8培养基较适用于培矮64S SP2代的花药培养,其中N6培养基在促进愈伤组织形成方面效果较好,而M8培养基则在促进绿苗分化方面效果较好。当2,4—D: NAA为2:1时,即激素采用2,4—D2mg/L+NAA1mg/L+KT0.5 mg/L较适合培矮64S SP2代材料的花药培养。水解酪蛋白对培矮64S的花药培养效果最好,其次为椰汁。水解酪蛋白的改良效果主要表现在愈伤组织形成方面,而椰汁则在促进绿苗形成和减少白苗发生方面效果较好。Ms分化培养基上的分化效果优于N6,材料在花药培养分化阶段需要较高浓度的氮源。
4、结合培矮64S花粉育性观察,花药培养力在不同取样日期的变化趋势是6月份最高,7月份有所降低,9月份最低,10月份有所提高。愈伤组织诱导率,晚造>早造,10月6日的最高,其次是7月23日;绿苗分化率,早造>晚造,其中6月7日最高;白苗分化率,晚造>早造,其中7月23日最低。结果表明培矮64S空间诱变SP2代材料的花药培养力不但受育性的影响,还受植株生理状况、花药培养条件等多种因素的影响。
5、在晚造的花药培养中共获得花药培养苗为295株,其中抽样对四个SP2代材料81株花药培养后代植株进行染色体倍性鉴定结果表明,二倍体的出现频率最高,达56.09%;其次为单倍体,为15.98%;而四倍体出现的频率为11.67%。这说明培矮64S SP2代材料与其它的水稻材料一样经花药培养后往往会发生自然加倍,并受多种因素的影响而使加倍频率不一致。
通过对培矮64S SP2代材料进行花药培养研究,筛选出了一些花药培养力较好的新光温敏核不育系水稻材料,说明空间诱变是创制和发掘新种源的有效途径之一。并进一步对其进行花药培养条件的优化研究,提高并改善花药培养力,为光温敏核不育系水稻的提纯以及水稻育种工作等打下基础。