【摘 要】
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褐飞虱(Nilaparvata lugens)是我国重要的水稻害虫。为了研究新的褐飞虱防治方法,本文对38株转化有褐飞虱几丁质合成酶A dsRNA(dsNlCHSA)的绿僵菌菌株进行了筛选。通过生物测定,有6株菌株对褐飞虱的控制效果显著高于对照(野生型菌株),其中控制效果最好的菌株为菌株23。通过无菌培养和ITS序列检测,证实了菌株23可以入侵进入褐飞虱体内。利用定量PCR技术,证明了转化入菌株2
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褐飞虱(Nilaparvata lugens)是我国重要的水稻害虫。为了研究新的褐飞虱防治方法,本文对38株转化有褐飞虱几丁质合成酶A dsRNA(dsNlCHSA)的绿僵菌菌株进行了筛选。通过生物测定,有6株菌株对褐飞虱的控制效果显著高于对照(野生型菌株),其中控制效果最好的菌株为菌株23。通过无菌培养和ITS序列检测,证实了菌株23可以入侵进入褐飞虱体内。利用定量PCR技术,证明了转化入菌株23的ds NlCHSA在绿僵菌入侵褐飞虱后起到了干涉作用。通过对不同浓度梯度的菌株23进行生物测定实验,得出褐飞虱二龄若虫第7天的半致死浓度为3.9*10^6孢子/ml。在对不同龄期褐飞虱的生物测定实验中,菌株23表现出对褐飞虱低龄若虫、高龄若虫以及成虫均有极高的致死效果,且褐飞虱龄期越低致死速度越快,龄期越高致死效果越好。为了获得更多RNAi靶基因,我们还筛选了其他可转入绿僵菌的褐飞虱dsRNA片段。Kr-h1是昆虫保幼激素信号通路的下游重要基因,具有调控昆虫生长发育、促进神经元细胞形成等作用。本文通过基因克隆获得褐飞虱Kr-h1的cDNA全长序列,经过数据库比对,根据其结构域设计并筛选出了6条dsRNA。合成这6条dsRNA,并分别注射褐飞虱四龄1天若虫,这6条dsRNA均能降低褐飞虱Kr-h1的表达,在只与褐飞虱、白背飞虱以及灰飞虱有同源性的dsRNA中,K3的杀虫效果最好,第15天的褐飞虱死亡率达到80.0%。本论文研究了dsRNA转化绿僵菌对褐飞虱的生物防治效果,为褐飞虱的生物防治提供了新的思路。
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