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目的:通过动物实验,人为建立兔肝移植癌模型,探讨分别以紫杉醇碘化油乳剂、阿霉素碘化油乳剂对兔肝VX2移植癌行肝动脉化疗栓塞术后疗效的评价,为肝癌介入选择用药提供可靠地实验依据。
方法:
1兔肝VX2移植癌模型制作1.1VX2细胞株制备:
将VX2瘤细胞接种于新西兰大白兔后腿上段外侧肌肉内,2周左右接种处可扪及一2cm×2cm实质性包块。由耳缘静脉迅速注入40mL空气处死兔子。无菌条件下剥离肿瘤包块,切取边缘生长旺盛的鱼肉样组织置于盛有生理盐水的平皿中,用眼科剪剔除豆腐渣样坏死组织和结缔组织。部分瘤组织制成细胞悬液,部分置于液氮灌中冷冻保存瘤株备用。
1.2VX2瘤细胞悬液的制备:
在超净台上,将新鲜鱼肉样癌组织在生理盐水内用眼科剪剪碎,反复吹打.经200目滤网筛过滤制成瘤细胞悬液,离心(1000r/min)5min,台盼蓝染色后活细胞计数,调整细胞密度为1×106/ml[1]。
1.3兔肝VX2移植癌模型建立实验动物术前禁食12h,用1%戊巴比妥钠3ml/kg[2]耳缘静脉注射全麻,取仰卧位,固定四肢于手术台上,上腹部备皮,常规消毒铺巾,于剑突下2cm正中开腹切口约4-5cm,暴露肝左中叶,用1ml注射器针头斜行穿刺肝实质,缓慢注入VX2细胞悬液0.3ml[3],注射完毕后快速拔针,在穿刺点处附上小块无菌明胶海绵块压迫止血。确认无出血及瘤细胞溢出后还纳肝脏,逐层缝合。术后青霉素40万u静脉缓慢推注,1次/日,连续3天。
2实验分组
在种植后第14天对肝VX2瘤灶行CT平扫加增强扫描。肝脏平扫,扫描参数:80kV,200mA,FOV14,层厚2.5mm,Pitch0.969:1;增强扫描采用经耳缘静脉高压团注方式,造影剂为碘佛醇注射液350剂量为1ml/kg[4],速度为1ml/s。在CT检查明确为单灶肝脏移植瘤的兔子中,选择瘤灶体积相近的30只兔子作为研究对象(瘤灶直径约2厘米),采用数字表法随机分为两组:每组15只。即:A组为阿霉素碘化油乳剂组(n=15)、B组紫杉醇碘化油乳剂组(n=15)。
3介入治疗和疗效观察:
3.1介入治疗在种植后第15天行肝动脉化疗栓塞术(TACE)。实验兔麻醉、固定后,腹股沟区常规备皮、消毒铺巾。在右侧腹股沟区域股动脉搏动最强处沿股骨走形纵行切开皮肤,暴露股血管鞘,分离出股动脉长约2cm,结扎远端股动脉。用自行改造的血管穿刺套管针(TERUMO公司生产的5F导管鞘内的穿刺套管针(18G)将穿刺针外套管头端切除约0.6cm,然后将切断面在粗布上磨至光滑)穿刺入股动脉,退出针芯,在鞘尾端迅速拧上Y阀防止出血,跟入TERUMOprogreat微导管及导丝,透视下寻找腹腔干。若腹腔干难以找出,可行腹主动脉造影寻找。选入腹腔干造影后,超选择至肝固有动脉造影,确认瘤灶位置及供瘤血管后,再超超选瘤灶供血动脉进行栓塞治疗。A组经导管灌注阿霉素碘油乳剂(2mg/kg,阿霉素与碘油乳剂混合为2.5mg/ml),即:将5mg阿霉素溶于2ml的超液态碘油中,再经导管注入,直至瘤灶血管出现铸形、血流停滞为止。B组经导管注射紫杉醇碘油乳剂(6mg/ml,紫杉醇与碘油乳剂浓度为2.5mg/ml),同样出现同上所述为止。术毕拔出导管,结扎近端股动脉,逐层缝合,兔大腿缓慢肌注40万u青酶素预防感染。
3.2疗效观察介入术后当时及术后7天再次行肝脏CT平扫加增强扫描。结合肿瘤术前和术后CT及DSA表现,观察两组兔子瘤灶体积的变化、肿瘤生长率、术后生存期及评估碘油栓塞术后瘤灶内的碘油沉积量的多少。
3.2.1肿瘤体积计算公式:V=a×b2/2(a:肿瘤的最大截面长径,b:与a垂直的短径,单位为毫米)3.2.2肿瘤生长率(tumorgrowthrate,TGR)计算公式:TGR=(肿瘤治疗后体积-治疗前体积)/治疗前肿瘤体积×100%)3.2.3术后生存期观察认真记录术后兔子的精神状态及饮食情况,生存时间。
3.2.4碘油沉积情况由三名资深影像学医师独立判断术后第7天瘤体内碘化油的沉积情况。
结果:
1.治疗前兔子体重及肿瘤体积比较:A组治疗前体重为2.80±0.22kg,B组治疗前体重为2.83±0.23kg,P=0.80,即P>0.05;A组治疗前肿瘤体积为2196±759mm3,B组治疗前肿瘤体积为2241±712mm3,P=0.74。即P>0.05。两组治疗前荷瘤兔体重及肿瘤体积无统计学差异(P>0.05)。
2.治疗后肿瘤体积变化:A组治疗后第7天肿瘤体积为3792±588mm3,B组治疗后第7天肿瘤体积为2717±855mm3,P<0.05。A、B两组经治疗后肿瘤体积有显著性差异。
3.肿瘤生长率(TGR):A组TGR=60±27%,B组TGR=16±9%,P=0.003,P<0.05,治疗后A、B两组肿瘤生长率相比具有统计学意义。
4.术后生存期:A组生存期为24±4天,B组生存期为34±5天,P=0.003,P<0.05。两组兔子术后生存期统计学有显著性差异。
5.介入术后肿瘤内碘油沉积情况:根据术后CT及DSA影像学表现,经三名经验丰富的影像学教授独立分析,对两组碘油沉积情况作出视觉评价。术中DSA判断两组碘油沉积情况未见明显差异,术后第7天CT扫描示:B组肿瘤内碘油沉积量明显多于A组。
结论:
紫杉醇碘油乳剂治疗组较阿霉素碘油乳剂治疗组对兔肝VX2移植癌疗效更好,术后生存期较阿霉素碘油乳剂组延长。