捕食线虫真菌少孢节丛孢的单核苷酸多态性分析

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单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNPs)是指基因组DNA序列中由于单个核苷酸的替换及插入或缺失而引起的多态性。近年来,SNPs逐渐成为研究包括进化和遗传多样性等生物学现象的首选分子标记。目前大多数SNPs的研究都集中在模式生物,而对包括多数真菌在内的非模式生物,SNPs知之甚少。本研究采用SNPs分析捕食线虫真菌少孢节丛孢Arthrobotrys oligospora的遗传多样性,该研究将针对环境污染对微生物变异的影响,同个物种的微生物是否具有地域差异等问题提供一些实验资料。 为了鉴定和分析少孢节丛孢菌株内的SNPs,选择分离自云南滇池底泥的一株菌株DC2作出发菌株,并建立了该菌株的小型基因组文库。根据21个片段设计的引物从DC2菌株中扩增出9694bp,另一个出发菌株WCC分离自四川九寨沟自然保护区森林土,离滇池约1000公里,用上述21对引物在该菌株中扩增出9761bp。联合两个出发菌株分析揭示21个片段都含有SNPs,出现频率在0.24-9.51%之间。在与DC2扩增的9694bp相比较,总的SNPs出现频率是2.76%。多数SNPs出现在GA之间和CT之间。 21对引物在分离自新疆喀呐斯森林(K44)和九寨沟湖底泥(X1)的2个菌株中扩增,扩增出的10个片段在上述四个地方的代表菌株中进行比对,结果显示,大量的SNPs仅在滇池分离的DE2菌株内出现,而在其他三个地方未出现,推论也许是滇池的严重污染导致了该菌的遗传物质变异较快。三个非污染区间的SNPs较低,表明该种的地域差异不是很大。 用三种限制性内切酶检测76个菌株三个片段,这些菌株分别来自上述三个地方,除了新疆喀纳斯外。76个菌株被分成6种单倍型。滇池的个体中包括了6种单倍型,九寨沟陆生样品中包括3个单倍型,水生样品中包括2个单倍型,这两种单倍型在陆生样品中都有。群体和个体的分析结果都表明,滇池底泥菌株遗传物质变异较其他地方快。
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