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本文建立了鸡血浆、组织和鸡粪中环丙氨嗪残留的高效液相色谱检测方法(HPLC),研究了环丙氨嗪在鸡体内的残留消除规律,并进行了环丙氨嗪的药效试验。
样品(血浆,组织,鸡粪)用三氯乙酸提取,经混合型强阳离子交换固相萃取小柱(MCX)净化,甲醇—氨水洗脱,氮气吹干后,流动相定容,过微孔滤膜,进行高效液相分析。色谱柱为强阳离子交换色谱柱(SCX),柱温35℃,血浆和组织样品检测的流动相为甲醇:乙腈:0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(pH=2.5)=10:25:65(V:V:V),鸡粪样品检测的流动相样品为甲醇:乙腈:0.05 mol/L的磷酸二氢钾溶液(pH=2.5)=20:15:65(V:V:V),紫外检测波长均为240 nm,流速为1 mL/min,进样量为20μL。建立的方法在100~1000μg/L浓度范围内线性关系良好,相关系数>0.99。该方法在10μg/kg~100μg/kg添加水平时的回收率为70%~92%,日内变异系数和日间变异系数均小于15%,定量限(LOQ)为10μg/kg,检测限(LOD)为5μg/kg。该方法可满足鸡组织中环丙氨嗪的残留分析要求。
本文建立的环丙氨嗪HPLC检测方法在20、50、100μg/kg添加水平上,各种样品的回收率和变异系数(CV)分别为:血浆样品回收率分别为82.6±7.9%,91.8±11.0%和88.9±4.2%;肌肉样品回收率分别为77.7±4.4%、84.0±8.0%和89.0±9.0%;肝脏样品回收率分别为75.0±7.6%、81.7±9.0%和88.2±4.0%;肾脏样品回收率分别为82.2±6.3%,84.8±5.1%,83.9±9.1%;皮肤样品回收率分别为83.9±7.2%,78.4±6.3%和76.1±3.8%;鸡粪样品回收率分别为90.8±12.6%,87.0±17.6%,93.9±9.2%。血浆中批内变异系数为7.42%~13.3%,批间变异系数为8.17%~14.5%;肌肉中批内变异系数为2.29%~7.50%,批间变异系数为2.61%~7.49%;肝脏中批内变异系数为2.40%~6.25%,批间变异系数为2.40%~11.3%;肾脏批内变异系数为2.33%~9.06%,批间变异系数为2.62%~9.36%;皮肤批内变异系数为1.05%~5.71%,批间变异系数为1.11%~5.62%。鸡粪批内变异系数为0.82%~5.21%,批间变异系数为0.81%~5.33%。
本实验进行了环丙氨嗪在鸡体内的残留消除规律研究。100只60日龄广西三黄鸡随机分成两组,一组为添加药物组(90只),按5000μg/kg拌料给药,一组空白对照组(10只),饲喂空白饲料,均自由饮水,连续饲喂7d。两组均于停药后0,4,6,8,12,24,36,48,72 h各时间点以颈静脉放血处死9只鸡,采集血浆、皮肤、肌肉、肝脏和肾脏进行组织中环丙氨嗪含量的测定。结果表明,停药0h,血浆、肌肉、肝脏、肾脏和皮肤的药物含量分别为55.9±6.8μg/kg,27.6±4.6μg/kg,60.1±5.8μg/kg,34.9±8.4μg/kg,19.9±8.4μg/kg。停药4h,血浆、肌肉、肝脏、肾脏和皮肤的药物含量分别为35.9±5.7μg/kg,21.6±5.2μg/kg,47.2±6.3μg/kg,17.3±4.4μg/kg,16.2±4.8μg/kg。停药4h后,肝脏和血浆中的残留量均降至MRLs(美国EPA规定,肉类、脂肪及动物副产品MRLs为50μg/kg)以下。给药后药物在体内分布广泛,肝脏、血浆中浓度最高,其次为皮肤,肌肉和肾脏。
给药期间及停药后收集鸡粪进行了环丙氨嗪药效试验。在给药的第1d,鸡粪中的药物对苍蝇的杀灭率达到100%,停药后第1d,对苍蝇的杀灭率仍为100%,直至环丙氨嗪停药后第3d,实验组和对照组家蝇的死亡率无显著差异(P>0.05),因此,建议在蝇活动频繁季节连续饲喂4~6周。