尼崎青霉菌葡萄糖氧化酶的分离纯化及性质研究

来源 :厦门大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kangxi2xjp30
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase,EC 1.1.3.4,简称GOD)在食品、医药及生物等领域有着广泛的应用。以尼崎青霉菌(Penicillium amagasakiense)为材料,采用发酵生产葡萄糖氧化酶,探讨不同时间、温度、转速、Ca2+、吐温80等对菌丝体和发酵液产酶的影响。24℃、200rpm、发酵六天、0.3mol/L的Ca2+、3%的吐温80的条件下,菌丝体和发酵液中总酶活力达到最大。发酵6天后,离心得菌丝体经破壁、缓冲液抽提,获得胞内葡萄糖氧化酶的粗酶液;发酵液即为胞外葡萄糖氧化酶的粗酶液。胞外葡萄糖氧化酶粗酶液浓缩后,采用DEAE-32离子交换柱层析、Sephacryl S-200分子筛凝胶过滤柱层析纯化,得到比活力为比活力达472 U/mg,纯化了29.7倍的的电泳单一纯的酶制剂,该酶的亚基分子量约为75 kD。该酶催化化葡萄糖反应的最适pH值为5.6,最适温度40℃,在pH 7.0,37℃条件下测得动力学,米氏常数Km值为122.6 mmol/L,Vm为25.52μmol/(L·min)。酶的热稳定性研究表明:该酶在pH 5.5-8.5区间和在温度低于50℃下稳定。化学修饰剂对酶活力的影响表明咪唑基、吲哚基、精氨酸胍基是该酶的活性功能基团,而蛋白质分子中巯基、二硫键、赖氨酸的ε-氨基、蛋氨酸侧链的硫醚基和丝氨酸残基与酶活力无关。溴代乙酸(BrAc)、NBS的抑制机理为非竞争性类型,而乙酰丙酮其抑制机理表现为竞争性类型。它们的抑制常数分别为26.5、19.2、7.35 mmol/L。金属离子对酶活力的影响表明金属离子(Li+、Na+、K+、Ca2+、Mn2+)对酶活力也没有影响。Al3+和Zn2+对GOD具有轻微的激活作用;Ba2+、Co2+、Cd2+对酶有轻微抑制作用;Cu2+、Ag+对该酶的抑制机理表现为竞争性类型,Hg2+的抑制机理表现为非竞争性类型。其抑制常数(K1)分别为10.78μmmol/L,0.065μmol/L和83.1μmol/L。有机溶剂对酶活力的影响表明甲醇、乙醇、丙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇对酶基本没有影响。甲醛对酶也都具有强烈的抑制作用,其半抑制浓度(IC50)分别为81.25 mmol/L。甲醛的抑制机理表现为竞争性类型,其抑制常数(K1)为30 mmol/L。变性剂对酶活力的影响:EDTA对酶基本上没有影响,脲对该酶有轻微的抑制作用。盐酸胍、SDS对酶有强烈的抑制作用,其抑制机理表现为竞争性类型,其抑制常数(K1)分别为1.75、57.15 mmol/L。
其他文献
2018年4月10日上午,中共中央总书记习近平在海南博鳌会见前来出席博鳌亚洲论坛2018年年会的台湾两岸共同市场基金会荣誉董事长萧万长一行。习近平欢迎萧万长先生和各位台湾工
低年级学生的英语教育必须要先了解他们的学习需求,准确定位课型,设计能调动他们积极性的教学活动,以提高他们的语言能力。本文以二年级新教材中的一节课为例,设计了多种活动
生物医学成像是多学科交叉和学术前沿的研究热点,已成为与人类健康息息相关的重要研究手段,在近年来得到了高度的关注。随着人们对健康和生活质量要求的不断提高,医疗影像设
Sun公司将推出UltraSpare通用处理器,可同时运行64个线程,除了服务器市场,该处理器还瞄准机顶盒、路由器和其它设备.据介绍,T2是世界最快的通用微处理器,每个内核能够执行8个线程
目标:2018年,全省采用装配式施工的建筑占同期新建建筑的比例达到10%;2020年,全省采用装配式施工的建筑占同期新建建筑的比例达到30%;到2025年,全省采用装配式施工的建筑占同
学前教育在高等教育和师范教育当中具有非常重要的地位,主要以向社会输送合格的专业学前教育师资。长期以来,家庭、学校、社会、乃至整个世界都非常重视幼儿在接受学前教育时
随着互联网以及移动终端的兴起,人类迎来了新媒体时代。新媒体时代是一个信息与数据不断膨胀并且各类文化内容不断碰撞的时期。电视节目在新媒体时代也必须伴随这个时代的特
本语篇围绕Su Hai一家三口到小吃店购买食品展开。语篇中主要新单词有noodles, 新句型为How about you? Anything else, How much are they? Something to drink? How much are they? 新单词和句型将会在语篇教学过程中得到解决。教学过程如下:  Step 1. Warming up  T: Hello, boys
牙隐裂是指发生于牙冠表面上的不易观察到的、非生理性的细小裂纹,是牙齿折裂中的一种,这种病在临床上因早期症状不明显,易被误诊、漏诊或误治,及早诊断、治疗牙隐裂是保留患
<正>桂政发[2015]35号各市、县人民政府,自治区人民政府各组成部门、各直属机构:现将《广西信访事项复查复核办法》印发给你们,请认真贯彻执行。2015年7月4日广西信访事项复