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葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase,EC 1.1.3.4,简称GOD)在食品、医药及生物等领域有着广泛的应用。以尼崎青霉菌(Penicillium amagasakiense)为材料,采用发酵生产葡萄糖氧化酶,探讨不同时间、温度、转速、Ca2+、吐温80等对菌丝体和发酵液产酶的影响。24℃、200rpm、发酵六天、0.3mol/L的Ca2+、3%的吐温80的条件下,菌丝体和发酵液中总酶活力达到最大。发酵6天后,离心得菌丝体经破壁、缓冲液抽提,获得胞内葡萄糖氧化酶的粗酶液;发酵液即为胞外葡萄糖氧化酶的粗酶液。胞外葡萄糖氧化酶粗酶液浓缩后,采用DEAE-32离子交换柱层析、Sephacryl S-200分子筛凝胶过滤柱层析纯化,得到比活力为比活力达472 U/mg,纯化了29.7倍的的电泳单一纯的酶制剂,该酶的亚基分子量约为75 kD。该酶催化化葡萄糖反应的最适pH值为5.6,最适温度40℃,在pH 7.0,37℃条件下测得动力学,米氏常数Km值为122.6 mmol/L,Vm为25.52μmol/(L·min)。酶的热稳定性研究表明:该酶在pH 5.5-8.5区间和在温度低于50℃下稳定。化学修饰剂对酶活力的影响表明咪唑基、吲哚基、精氨酸胍基是该酶的活性功能基团,而蛋白质分子中巯基、二硫键、赖氨酸的ε-氨基、蛋氨酸侧链的硫醚基和丝氨酸残基与酶活力无关。溴代乙酸(BrAc)、NBS的抑制机理为非竞争性类型,而乙酰丙酮其抑制机理表现为竞争性类型。它们的抑制常数分别为26.5、19.2、7.35 mmol/L。金属离子对酶活力的影响表明金属离子(Li+、Na+、K+、Ca2+、Mn2+)对酶活力也没有影响。Al3+和Zn2+对GOD具有轻微的激活作用;Ba2+、Co2+、Cd2+对酶有轻微抑制作用;Cu2+、Ag+对该酶的抑制机理表现为竞争性类型,Hg2+的抑制机理表现为非竞争性类型。其抑制常数(K1)分别为10.78μmmol/L,0.065μmol/L和83.1μmol/L。有机溶剂对酶活力的影响表明甲醇、乙醇、丙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇对酶基本没有影响。甲醛对酶也都具有强烈的抑制作用,其半抑制浓度(IC50)分别为81.25 mmol/L。甲醛的抑制机理表现为竞争性类型,其抑制常数(K1)为30 mmol/L。变性剂对酶活力的影响:EDTA对酶基本上没有影响,脲对该酶有轻微的抑制作用。盐酸胍、SDS对酶有强烈的抑制作用,其抑制机理表现为竞争性类型,其抑制常数(K1)分别为1.75、57.15 mmol/L。