棉花GhBSK1基因克隆及其功能分析

来源 :中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yyll2008
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已有研究表明油菜素甾醇类物质(brassinosteroids,BR)对于棉花生长发育具有重要作用。但是目前关于棉花BR信号转导途径的认识还比较少,BR调节棉花生长发育的分子机理也不是很清楚。  本文克隆了一个棉花BSK基因—GhBSK1,序列比对表明它与模式植物拟南芥的AtBSK7编码的氨基酸序列相似性达79%。荧光定量RT-PCR检测结果表明GhBSK1在棉花的子叶、茎和棉纤维快速伸长期相对表达量较高。对来源于异源四倍体棉种陆地棉TM-1[(AD)1]、二倍体棉种草棉(金塔草棉(A1))和瑟伯氏棉(D1)的GhBK1测序比对,结果表明存在于A染色体亚组也存在于D染色体亚组的GhBSK1在进化上高度保守(同源性为100%),推测GhBSK1在棉花生长发育中可能具有重要功能。GhBSK1-GFP融合蛋白定位于细胞膜上,将GhBSK1的一个预测可能与膜定位有关的位点(Gly-2)进行突变,导致GhBSK1的膜定位发生改变,结果将影响其功能。GhBSK1基因表达受高温胁迫诱导,在野生型Co1-0中过表达GhBSK1,可显著地增强转基因植株对高温的耐受性,表明GhBSK1可能在棉花生长过程中对抗高温逆境胁迫具有重要作用。通过酵母双杂交系统从棉花纤维cDNA文库中筛选到4个与GhBSK1相互作用的蛋白,为进一步研究GhBSK1的基因功能及其抗高温逆境的分子机理奠基了基础。同时,将构建的过量表达载体、棉纤维特异表达载体和棉花RNAi干扰载体转化棉花,获得了胚性愈伤组织,分子鉴定和共聚焦显微镜观察结果初步表明GhBSK1已经转入棉花。进一步分析GhBSK1转基因棉花植株的表型及其对高温的响应情况,同时结合GhBSK1互作蛋白的功能研究,能够深入阐明GhBSK1的基因功能及其抗高温逆境的分子机理。
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