有机磷、有机氯农药降解基因工程菌的构建、表达与应用

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rian2sd
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农药污染大部分都是有机磷和有机氯的混合污染。而六六六在有机氯农药中应用非常广泛,不同异构体的物理化学性质也不同。南京农业大学报道分离出了一株能够降解六六六四种异构体的菌株Sphingobiumsp.BHC-A,本实验室分离出的一株可以降解六六六的优势菌株Sphingomonassp.HZ-1。最近,我们又从曾经受到严重污染的天津农药厂附近分离鉴定了一株新的六六六降解菌,命名为SphingomonaspaucimobilisLZ-2,该菌株不仅能以六六六作为唯一的碳源和氮源生长,在30h内可以降解5mg/l的六六六四种异构体;实验室内的生物修复实验表明该菌能更快更有效地降解污染土壤中的六六六的污染。  在降解农药的优势菌株方面,目前报道的农药降解菌主要有有机磷降解菌(Pseudomonasdiminuta,Pseudomonassp.Enterobactersp.),有机氯降解菌(SphingobiumjaponicumUT26,SphingobiumindicumB90A,Pseudomonassp.)等等,能够共同降解两种或以上农药的菌株还很少报道。本研究利用丁香假单胞菌的外膜蛋白一冰成核蛋白的N端和C端结构域(INPNC)作为表面锚定模序,将甲基对硫磷水解酶(MPH)展示在微生物细胞表面。通过构建编码INPNC-MPH融合蛋白的广宿主载体pIM-His,表面表达有机磷水解酶(MPH),并将其转化本实验室野外筛选得到的六六六降解菌SphingomonaspaucimobilisLZ-2中(保藏号:3540,保存于中国科学用微生物所菌种保藏中心)成功构建基因工程菌株SWL-1。该转基因工程菌能够同时降解有机磷(如甲基对硫磷,对硫磷等)和有机氯农药六六六。气相色谱实验证明,该株基因工程菌在水环境中40h之内降解5ppm的HCH,研究表明表达有机磷水解酶融合蛋白的菌株达到了与野生菌株一样的降解林丹的效率,证明其降解效率并没有收到外缘蛋白的影响。同时,该菌株对于甲基对硫磷的降解效率五倍于胞内表达MPH的菌株,这些结果均表明了MPH与冰核蛋白融合蛋白成功表达在了野生菌表面,该转基因工程菌被命名为SWL-1。另外,作为一株高效、快速降解有机磷农药,又可以降解六六六的降解菌,它在农药污染水处理以及实时环境监测方面的应用,奠定了极好的物质基础。
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