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第一部分胞外信号调节激酶在CCI大鼠脊髓背角的表达
目的: 观察大鼠坐骨神经慢性压迫损伤(chronicconstrictioninjury，CCI)模型成功建立后脊髓背角磷酸化胞外信号调节激酶(phospho-extracellularsignal-regulatedkinase，p-ERK)的变化。
方法: SD大鼠60只，随机分为3组：正常对照组(Naive组)、假手术组(Sham组)、慢性压迫损伤(CCI)组。每组继续分为两个亚组，分别进行：①行为学实验(n=8)，测定动物机械缩足反射阈值(mechanicalwithdrawalthreshold，MWT)和热缩足反射潜伏期(thermalwithdrawallatency,TWL)；②免疫组织化学染色(n=6)：在术后5d、10d急性处死动物用免疫组织化学方法观察脊髓背角p-ERK变化情况。
结果: 1.在整个实验期间，Naive组与Sham组大鼠行为学无明显改变。CCI组大鼠坐骨神经结扎后，MWT和TWL呈进行性下降，在术后1d即低于基础痛阈(P＜0.05)并在术后5d降至最低。术后3d至15d期间MWT和TWL处于相对稳定状态。
2.Naive组与Sham组大鼠脊髓背角仅有少量p-ERK免疫阳性神经元表达。CCI组大鼠术后5d、10d，脊髓背角浅层p-ERK显著多与Naive组与Sham组(P＜0.05)且主要分布于患侧(结扎侧)。
结论: 脊髓背角ERK活化可能参与神经病理性疼痛的信号转导过程。
第二部 分鞘内注射U0126对CCI大鼠痛行为及脊髓背角p-ERK表达的影响
目的: 通过鞘内使用胞外信号调节激酶激酶(extracellularsignal-regulatekinasekinase，ERKK，即MEK)抑制剂U0126观察脊髓背角胞外信号调节激酶(ERK)与大鼠痛行为之间的关系，进一步探讨脊髓背角ERK激活在神经病理性疼痛中的作用。
方法: 建立成功CCI模型，在于术后5d鞘内注射溶媒(5％DMSO)及不同剂量的MEK抑制剂U0126(0.5，1.0，5.0μg)，总量均为10μl。观察注射后30min、1h、2h、6h、12h、24h动物的行为学改变；用免疫组织化学方法和westernblot方法观察鞘内注射U01265.0μg/10μl以及5％DMSO10μl后30min、2h、6h、12h、24h脊髓背角p-ERK变化。
结果: 1.鞘内注射U0126能剂量依赖性地减轻大鼠的机械痛觉过敏和热痛觉过敏。
2.鞘内注射U0126能抑制CCI大鼠明显减弱脊髓背角p-ERK的表达，并与行为学改变在时间上有一致性。免疫组织化学结果显示，鞘内注射U01265μg0.5h后，脊髓背角p-ERK阳性神经元细胞明显减少(P＜0.01)；而后随时间延长脊髓背角p-ERK阳性神经元细胞逐渐增加，但在2h、6h时间点较正常大鼠仍有统计学差异(P＜0.05)。
3.westernblot结果显示，正常大鼠p-ERK1/2含量较低。CCI5d脊髓背角胞浆与胞核p-ERK1/2含量显著增加，与正常对照组相比有统计学差异(P＜0.05)。鞘内注射U01265μg0.5h后，胞浆与胞核p-ERK1与p-ERK2均显著减少，与CCI5d相比差异有显著性(P＜0.05)。
结论: 脊髓背角ERK级联系统参与神经病理性疼痛的信号转导过程。
第三部分 脊髓背角胞外信号调节激酶参与CCI大鼠痛觉早期形成过程
目的: 观察在CCI形成过程中持续应用细胞外信号调节激酶激酶U0126或ERK1/2的反义寡核苷酸对大鼠痛行为的影响，探讨ERK激活在慢性神经病理性疼痛形成中的作用。
方法: 大鼠行鞘内置管，随机分成假手术+鞘内注射生理盐水(Sham)组、CCI+鞘内注射生理盐水(CCI)组、CCI+鞘内注射U0126(C+U)组、CCI+鞘内注射5％DMSO(C+V)组、CCI+鞘内注射反义寡核苷酸(C+A)组、CCI+鞘内注射C错义寡核苷酸(C+M)组。所有药物于坐骨神经结扎前1d至结扎后3d期间通过PE管鞘内注入，每天2次，每次10μl。观察术后3d、5d、10d、15d大鼠痛行为学变化；用免疫组织化学和westernblot方法观察大鼠脊髓背角p-ERK的改变与痛行为之间的关系。
结果: 1.持续鞘内注射U0126或ERK反义寡核苷酸对大鼠基础痛阈没有明显影响，但能明显抑制CCI引起的机械性和热痛觉过敏，这种作用可持续至神经损伤后13d。
2.免疫组织化学结果显示，持续鞘内注射U0126或ERK反义寡核苷酸也能明显抑制CCI引起的脊髓背角p-ERK免疫反应阳性神经元的表达。与行为学结果一致。
3.Westernblot结果显示，与Sham组大鼠相比，CCI组大鼠脊髓神经元胞浆与核内p-ERK1与p-ERK2水平均明显增加，以CCI后5d最为显著，而ERK1与ERK2水平未见明显变化。鞘内注射U0126与ERK反义寡核苷酸能明显抑制CCI引起的胞浆与核内p-ERK水平的增高。
结论: 脊髓背角ERK激活参与CCI致神经病理性痛的形成和维持。