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褐牙鲆(Paralichthys olivacens)属鲽形目，牙鲆科、牙鲆属，俗称比目鱼、片口。常栖息泥沙、砂石或岩礁地质、水深20～50m和潮流较为通畅的沿岸水域，具潜伏习性，白天常潜伏在泥沙中不大活动，夜间出来觅食。其自然分布区主要是中国沿海、朝鲜半岛、日本和俄罗斯的亚洲海区，且生长快、个体大、肉质细嫩鲜美，是名贵的重要海水养殖品种之一。褐牙鲆为冷温性底栖鱼类，比较适宜温度较低的水环境，我国关于褐牙鲆人工繁殖、养殖及生理方面的研究主要集中在北方地区。近几年来，为加快海水养殖结构调整，对舟山本地褐牙鲆生殖生理方面的研究逐渐增多，并已初步建立适于舟山褐牙鲆的育苗生产工艺。本试验即通过建立一种快速而高效的超低温冷冻保存模式，一方面为舟山褐牙鲆大规模工厂化苗种繁育提供可靠的参考依据；另一方面也为其种质资源保存提供理论基础。
1. 褐牙鲆精子的生理学特性及超低温冷冻保存
褐牙鲆精浆pH值为(7.90±0.26)，精子密度为(1.03×1010)/ml，精浆渗透压为(308.50±7.85)mOsm/kg，K+、Na+在精浆中的浓度分别为(27±3)mmol/A、(71±5)mmol/L，精子寿命(23±2)min。在盐度为35，pH为8时，精子的活力最高，分别达到(93.33±5.67)％和(89±3.33)％。精子在室温(25℃)条件下，可存活4d；在低温(4℃)条件下可以存活7d。以S3液作为稀释液，16％的DMSO作为抗冻剂，利用快速降温法对精子进行超低温冷冻保存，38℃水浴快速解冻，解冻后的精子获得最高的活力为(84±3.67)％。
此外，通过应用计算机辅助精子分析系统(CASA)对超低温冷冻前后褐牙鲆精子的运动参数进行了分析，结果表明：鲜精与冻精的运动精子占总精子数的百分率(MOT)，平均曲线运动速度(VCL)，平均直线运动速度(VSL)，平均路径运动速度(VAP)和精子运动路线的曲折程度(LIN)相比，都有显著性差异(p<0.05)，而激活0.5min时，鲜精和冻精的MOT值差异不显著(p>0.05)。同时超低温冷冻前后，直线运动、曲线运动、左右摆动和不运动的精子数目占总精子数的百分值分别为(24.49+3.87)％、(48.53+4.55)％、(24.72+2.86)％和(2.27±1.22)％，而且随着激活时间的延长，褐牙鲆精子的运动状态发生改变，直线运动和曲线运动的精子数目逐渐减少，而不运动和左右摆动的精子数目逐渐增多。
2. 褐牙鲆精子超微结构
对自然成熟的褐牙鲆精子的超微结构进行了观察，电镜显示，褐牙鲆精子的头部近似球形，直径(1.49±0.17)μm，尾部鞭毛较长，达(40.17+0.65)岬。褐牙鲆精子由头部和尾部(鞭毛)构成。头部的顶端无顶体，头部的细胞核为圆形，染色质致密。精子细胞质膜与核膜间有较大间隙，两者之间分布有许多细胞质和少量囊泡。植入窝位于细胞核后端的凹陷处，中心粒复合体位于植入窝内。基体长轴与精子的长轴平行，近端中心粒与基体呈钝角排列。基体的头端由电子致密物质构成，基体的尾端与鞭毛轴丝起始端的的9组外周二联微管相连。袖套中分布着线粒体，近袖套内膜的细胞质中存在着一层与袖套内膜平行并且比它薄的膜。尾部从袖套腔中伸出，分为主段和末段，主段中心结构是轴丝。轴丝外有少许细胞质，并在一定部位形成侧鳍。轴丝起始端无中央微管对。在尾部的末段，轴丝逐渐降解、变细，形成鞭毛末端。