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目的:
分析159株临床分离的非重复碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药性;评价17组抗菌药物组合对其体外抗菌效应;探究体外联合药敏试验对碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌表现不同作用的机制。为临床合理联合应用抗菌药物治疗碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌感染提供实验室证据。
方法:
收集2010年5月-2011年5月,首都医科大学附属北京友谊医院临床检验中心细菌室分离的来自不同患者的铜绿假单胞菌159株,亚胺培南及美罗培南耐药。
采用微量肉汤稀释法测定单药的最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concenltration,MIC),采用棋盘法测定联合用药的MIC,计算部分抑菌指数(Fractional inhibitory concentration,FIC),判断药物组合的效应。采用三维水解试验检测β-内酰胺酶、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)等方法检测多重耐药菌可能存在的耐药机理。
结果:
159株临床分离的非重复碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌,单药MIC显示铜绿假单胞菌对于美国临床实验室标准化委员会2010(Clinical And Laboratory Standards Institute,CLS12010)推荐和临床常用抗菌药物(碳青霉烯类、头孢菌素类、β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类)敏感率低,呈现多重耐药表型。尤其是对于头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦耐药性为100%,对于头孢毗肟、氟喹诺酮类、氨基糖苷类大约半数细菌呈现耐药,对于多粘菌素B全部细菌呈现敏感。不同药物组合对于碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌的作用也有很大差别:对于妥布霉素＋头孢他啶组合,试验菌株对于两种单药的耐药性在45%左右,两种药物联合作用表现为协同作用的比例达到30%。全部菌株在亚胺培南单药耐药的情况下,亚胺培南＋妥布霉素表现出53.3%的相加作用,美罗培南＋妥布霉素的相加作用与此类似,接近50%。
通过三维实验检测159株MRPA,其中15株产MBL、13株产AmpC酶。体外联合药物敏感试验,加入MC-207,110后约38%的菌株对碳青霉烯类抗生素的MIC下降4个梯度。检测试验菌株,21株携带IMP基因,18株携带ampC基因;检测OprD2通道蛋白,159株中约有48%的菌株OprD2丢失。
结论:
1.IMP、AmpC水解酶不是本院碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因;
2.碳青霉烯耐药的铜绿假单胞菌通常情况下也会对头孢菌素类、β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂、氨基糖苷类、氟喹诺酮类等产生多重耐药性;
3.对于碳青霉烯耐药的铜绿假单胞菌,三代头孢菌素联合氨基糖苷类体外实验可以表现较高比例的协同作用;
4.外排泵高表达以及外膜孔道蛋白的缺失是本院碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的重要原因;
5.检测到碳青霉烯耐药的铜绿假单胞菌携带水解酶基因,但是与筛选试验表型不完全符合,推测该水解酶基因未表达。