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目的:研究近视相关因子SLC39A5在人胚胎眼巩膜成纤维细胞(Human fetal sclera fibroblasts,HFSFs)中的表达及近视调控因子转化生长因子-β2(Transforming growth factorβ2,TGF-β2)对其表达的影响,并观察干预(上调/下调)SLC39A5表达后基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinase 2,MMP-2)的表达变化,分析SLC39A5与TGF-β2信号通路的关系,初步探讨SLC39A5在巩膜重塑及近视发病机制中的作用。方法:1.传代培养人胚胎眼巩膜成纤维细胞,选取5-7代生长状态良好的HFSFs用于实验。2.通过定量反转录聚合酶连锁反应(Quantificational real-time polymerase chain reaction,QRT-PCR)、免疫印迹法(Western-blot,WB)以及细胞免疫荧光等方法检测正常人巩膜成纤维细胞中SLC39A5的表达,以THP-1细胞为阳性对照,研究SLC39A5在HFSFs中m RNA、蛋白水平的表达及在细胞内的定位。3.予入液终浓度分别为2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L的重组人TGF-β2蛋白刺激HFSFs,刺激时间分别为4h、8h、16h,采用QRT-PCR、Western-blot检测TGF-β2刺激后的人巩膜成纤维细胞中SLC39A5的表达。4.利用RNA干扰和重组蛋白技术分别下调和上调SLC39A5的表达,采用Western-blot方法检测HFSFs中SLC39A5、MMP-2蛋白的表达,观察改变SLC39A5的表达对MMP-2的影响。结果:1、成功传代培养HFSFs。2、采用QRT-PCR和细胞免疫荧光定位检测后发现正常HFSFs中存在SLC39A5的表达。3、当刺激HFSFs的TGF-β2浓度从2.5μg/ml逐渐增加到20μg/ml,刺激时间由4h增加到16h时,HFSFs中MMP-2 m RNA的表达量明显增加,且在TGF-β2浓度为5μg/ml、作用时间为8h时MMP-2 m RNA的表达量达到峰值,此时细胞中SLC39A5 m RNA表达量也较正常对照组明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western-blot检测TGF-β2刺激后的HFSFs,TGF-β2增加时,MMP-2的表达也随之增加,证明在HFSFs中TGF-β2对MMP-2有上调作用。4、选取被TGF-β25ug/ml刺激8h的HFSFs,通过RNA干扰和重组蛋白分别下调/上调SLC39A5后,western-blot检测发现两组细胞中SLC39A5蛋白的表达量存在差异,且差异具有统计学意义(P<0.05),但在成功干预SLC39A5后MMP-2的表达并未发生明显改变。结论:1.在人胚胎眼巩膜成纤维细胞中存在SLC39A5 m RNA及蛋白的表达。2.TGF-β2刺激可导致HFSFs中SLC39A5的表达量明显增加,SLC39A5可能与TGF-β2共同参与近视的形成。3.通过si RNA下调和重组蛋白上调SLC39A5表达成功后,人巩膜成纤维细胞中MMP-2的表达无显著性变化,提示SLC39A5参与近视的作用机制可能与MMP-2无关。