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目的：研究富血小板血浆(Platelet rich plasma，PRP)在糖尿病小鼠下肢缺血模型中，对缺血下肢的血流恢复作用及其可能机制，以及纤溶酶原激活物抑制剂-1（Plasminogen activator inhibitor type-1，PAI-1）对肌肉纤维化的影响。 方法：1、PRP的制备：小鼠被麻醉后，经腹部腔静脉取血，采用二次梯度离心法得到PRP。2、PRP中VEGF-A和PDGF-BB的含量测定：以酶联免疫吸附实验（Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA）检测PRP中血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor-A，VEGF-A)、血小板衍生生长因子(Platelet derived growth factor-BB，PDGF-BB)的含量。3、糖尿病小鼠模型的建立：选取8周左右的C57/BL6小鼠，连续5天腹腔注射小剂量链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)，破坏其胰岛β细胞，连续喂养高脂高糖饲料2周，检测血糖值，每周一次。4、小鼠下肢缺血模型的建立：麻醉小鼠后，于左腹股沟位置剪开皮肤，经小鼠股深动脉下缘和腘动脉上缘结扎其左下肢的股动脉，并离断结扎双结之间股动脉干支。待小鼠复温后，用激光多普勒扫描仪在不同的时间节点（结扎前（记为0d）和结扎后（记为1d）、3、7、11、14d）扫描小鼠双下肢的血流恢复情况。5、实验分组：术后第2天将小鼠随机分为3组，即①对照组（腓肠肌注射生理盐水50μL）;②C57PRP组（腓肠肌处注射C57来源PRP50μL）;③PAI-1-KO PRP组（腓肠肌处注射从PAI-1基因敲除鼠中分离的PRP50μL），每组6只。6、标本收集：在第14天扫描后，处死小鼠，取双侧内收肌和腓肠肌，部分以4％多聚甲醛固定后送病理科包埋切片，部分以液氮急冻，保存于-80℃冰箱，用于后续分子生物学检测。7、病理学检测：①HE(Hematoxylin-eosin staining)染色：观察缺血后的肌肉再生修复及毛细血管分布情况;②免疫荧光：用CD31标记血管内皮细胞，用α-SMA标记血管平滑肌细胞，观察血管新生和周细胞覆盖率，评价血管形成及血管稳定性;③Masson染色：观察肌肉内胶原沉积情况。8、荧光定量PCR(Real time PCR，RT-PCR)：检测肌肉组织中VEGF-A、PDGF-BB、转移生长因子-β(Transfer growth factor-β，TGF-β)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达水平。9、统计方法：所有数据采用spss17.0软件进行单因素方差分析，计量资料以x-±s表示，P＜0.05表示差异具有统计学意义。 结果：1、PRP的ELISA检测：C57小鼠的PRP与PAI-1基因敲除鼠的PRP中VEGF-A、PDGF-BB的含量无显著差异。2、糖尿病小鼠模型的建立：经连续5天的STZ注射后，用高糖高脂饲料喂养2周，所有的小鼠血糖均高于11.1mmol/L，造模成功。3、PRP对小鼠下肢缺血模型下肢血流恢复的影响：与对照组相比，PAL-1-KO PRP组与C57PRP组增加小鼠下肢缺血部位的血流灌注，但两组无明显差异。4、HE染色结果显示：PAI-1-KOPRP与C57PRP组毛细血管分布及肌肉再生优于对照组。5、免疫荧光结果显示：与对照组相比，C57PRP组与PAI-1-KO PRP组缺血部位CD31和α-SMA阳性表达更高，提示PRP促进了微血管的形成和血管的稳定性。6、Masson染色结果显示：3个实验组均显示了不同程度的胶原沉积，与C57PRP组相比，PAI-1-KO PRP组纤维化得到改善。7、RT-PCR结果显示：PRP实验组缺血侧肌肉中的VEGF-A、PDGF-BB、TGF-β的表达量均高于对照组缺血侧的表达量，非缺血侧则无明显差异。3个组缺血侧腓肠肌的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达水平有显著差异，C57PRP组的表达水平高于对照组，PAI-1-KO PRP组的表达水平低于对照组。 结论：1、PRP可以促进小鼠的缺血下肢恢复血流灌注，对糖尿病小鼠下肢缺血的治疗有积极作用。2、PRP可以促进血管的形成、成熟。3、PRP可以上调VEGF-A、PDGF-BB、TGF-β基因水平的表达。4、PAI-1基因敲除后的PRP可以改善小鼠下肢缺血，同时减少纤维化形成。