【摘 要】
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为了提高奶牛乳房炎的治疗效果，减少传统抗生素治疗过程中的耐药性和药残问题，保障动物性食品安全，亟需找到一种安全、高效的治疗方法。乳铁蛋白是一种具有广谱抗菌活性的蛋白质
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为了提高奶牛乳房炎的治疗效果，减少传统抗生素治疗过程中的耐药性和药残问题，保障动物性食品安全，亟需找到一种安全、高效的治疗方法。乳铁蛋白是一种具有广谱抗菌活性的蛋白质，能否将其用于治疗奶牛乳房炎，目前还未见明确报道。为了验证乳铁蛋白治疗奶牛乳房炎的可行性和治疗效果，本研究分别从提纯奶牛初乳中乳铁蛋白、建立小鼠乳房炎模型和乳铁蛋白对该模型的治疗效果三个方面进行了研究，研究结果如下:
1、奶牛初乳离心除去乳脂，经不同浓度的饱和硫酸铵沉淀离心，获得乳铁蛋白粗提品。乳铁蛋白粗品经pH8.0的PBS透析至无NH4+和SO42-，上SephadexG-100柱，用0.01MpH8.0的PBS缓冲液进行洗脱，收集出现蛋白峰的洗脱液，即为乳铁蛋白的纯品。经SDS-PAGE电泳鉴定，乳铁蛋白的分子量为80KD左右，紫外分光光度计检测初乳中乳铁蛋白浓度为1.836mg/mL。
2、无菌取乳房炎病牛的乳汁，经分离鉴定，选取致病性的金黄色葡萄球菌，用灭菌生理盐水分别配制成浓度为1.0×105CFU/mL和2.0×10SCFU/mL的菌悬液。对30只孕鼠分别经第4对乳房基部注射50μL的灭菌生理盐水、1.0×105CFU/mL和2.0×105CFU/mL的金黄色葡萄球菌悬液，分为对照组、低浓度感染组、高浓度感染组，每组10只。24h后，观察感染小鼠的临床症状，第4对乳腺的组织学变化。
结果发现，24h内高浓度组小鼠出现明显的乳房炎临床症状，低浓度组症状较轻，对照组未出现任何症状。剖检发现，感染小鼠乳腺及周围组织有广泛的充血、出血现象，乳腺局部肿胀变硬，有炎性产物渗出。组织切片显示，乳腺结构部分崩塌，间质变宽，模糊不可辨认，腺泡腔内有大量炎性细胞浸润，以嗜中性粒细胞为主，小叶间导管均有不同数量的红细胞浸润。临床症状和组织切片结果表明，本试验成功建立了小鼠乳房炎模型。
3、将上述分离保存的金黄色葡萄球菌在固体培养基上活化，配制浓度为1.0×106CFU/mL的菌悬液，用标准试管二倍稀释法测定BLF对金黄色葡萄球菌的MIC。将MIC菌液降低3个数量级，培养计数菌落数作为标准，BLF梯度菌液培养的菌落均值小于标准菌落的BLF浓度即为杀菌浓度(MBC)。用分光光度计测定金黄色葡萄球菌0，1，2，4，6，8，12，16，24，36，48，72h菌液在600nm波长的吸光度值，绘制杀菌曲线。将30只乳房炎小鼠，随机分为对照组和实验组，每组10只。第4对乳房基部注射50μL3倍MIC的BLF和等量的生理盐水，8h注射一次，连注3次。24h和48h后，剖杀小鼠，观察感染小鼠的存活率、临床症状和第4对乳腺的组织学变化。
结果表明，BLF对金黄色葡萄球菌的MIC为2mg/mL，同时证明BLF对金黄色葡萄球菌具有一定的杀菌作用，杀菌浓度为6mg/mL。BLF体内治疗试验证明，BLF在小鼠体内对乳房炎致病性金黄色葡萄球菌性同样有抑制作用，且体内抑菌作用与用药时间正相关。
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