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研究目的肠易激综合征(IBS)是一种以腹部不适或疼痛为主要特征的胃肠道疾病。目前IBS的发病机制尚不明确,临床治疗手段还很有限。因此,我们需要进一步研究IBS的分子机制,寻找新的分子靶点。有大量文献表明,P2X7Rs在炎症疼痛和神经病理性疼痛中发挥重要的作用,但是在内脏痛的形成过程中,脊髓中P2X7Rs的作用以及调节机制的研究较少。肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)作为众多信号通路中的信号转导分子,广泛参与了调控炎症痛和神经病理性疼痛,但在内脏痛的形成过程中,TRAF6是否参与P2X7Rs表达的调控还不十分清楚。因此,本课题旨在研究TRAF6和嘌呤受体P2X7Rs在新生期结肠炎性刺激诱导的大鼠内脏痛敏中的作用。实验方法1、选择出生10天的SD雄性大鼠,将2cm导管缓慢插入肛门内,结肠注射0.2m L 0.5%乙酸,建立新生期结肠炎性刺激模型。2、应用结直肠扩张(CRD)的行为学方法检测大鼠在不同时间段的疼痛阈值,从而来反映NCI(neonatal colonic inflammation)诱导的痛觉过敏。3、取大鼠T13-L2背根神经节对应段的脊髓背角,运用western blotting和Q-PCR的方法,检测不同时间段TRAF6和P2X7Rs的蛋白和mRNA的表达情况。4、鞘内注射P2X7Rs拮抗剂A438079,检测其是否翻转NCI诱导的大鼠内脏痛觉过敏,从而来确定P2X7Rs是否参与内脏痛敏的发生。5、鞘内注射TRAF6 siRNA,检测其能否翻转NCI大鼠内脏痛,进而确定TRAF6是否参与内脏痛敏。6、运用免疫荧光共定位的方法,检测P2X7Rs和TRAF6在脊髓背角中的细胞定位。实验结果1、行为学实验表明,与对照组大鼠相比,NCI大鼠的CRD阈值在第六周和第八周明显降低。而第四周和第十周时,NCI大鼠和对照组大鼠的CRD阈值没有明显差异。2、NCI增加了六周和八周大鼠肠对应段的脊髓背角中P2X7Rs分子的表达。鞘内注射P2X7Rs抑制剂A438079能显著降低CRD阈值,并且呈现时间和剂量的依赖性。3、在六周和八周的NCI大鼠肠对应段的脊髓背角中,TRAF6表达显著上调。鞘内注射TRAF6 siRNA能明显下调P2X7Rs的表达,而且能显著减缓NCI诱导的大鼠痛觉过敏,效果呈时间的依赖性。4、免疫荧光结果显示,P2X7Rs主要在星形胶质细胞和神经元中表达,但TRAF6只在星形胶质细胞中表达,并且P2X7Rs和TRAF6在星形胶质细胞中共表达。结论我们的结果显示P2X7Rs和TRAF6参与NCI诱导的大鼠内脏痛觉过敏的形成和发展,并且P2X7Rs的表达受到TRAF6的调控。因此,本研究在一定程度上提示了P2X7Rs可作为治疗IBS病人内脏疼痛的潜在分子靶点。