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背景与目的：人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)是一种为无包膜的小型双链环状DNA病毒,目前已鉴定有118型,而其中有约40型可感染生殖道粘膜。根据HPV感染后诱发病变的良恶性不同进一步分为高危型和低危型两大类,90%以上的宫颈癌组织中可检测到高危型HPV16,18,31等型的DNA,以HPV16型为主。HPV16型E6、E7基因在HPV16感染相关的宫颈癌及54%以上中重度宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)中持续性表达,因此HPV16型E6、E7蛋白与宫颈癌的发生发展密切相关,而E6、E7蛋白被认为是用于免疫治疗的首选蛋白。本研究主要进行HPV16型E6、E7基因的克隆,并在体外诱导表达E6、E7蛋白,为今后的蛋白疫苗的动物实验、进一步探索HPV16型E6、E7蛋白致宫颈癌分子机制及宫颈癌及癌前病变的免疫治疗奠定基础。方法：1.用PCR法从宫颈癌组织中扩增HPV16型E6、E7基因；2.将HPV16型E6、E7基因片段与克隆载体pMD 19-T Simple vector连接,构建HPV16型E6、E7的克隆质粒pMD 19-T-E6,pMD 19-T-E7；3.用限制性内切酶EcoRⅠ、HindⅢ将HPV16型E6、E7基因从克隆质粒pMD 19-T-E6, pMD 19-T-E7切下,用T4连接酶与表达载体pET28a(+)连接,构建HPV16型E6、E7的表达质粒pET28a(+)-E6、pET28a(+)-E7;4.将表达质粒pET28a(+)-E6、pET28a(+)-E7转化至大肠杆菌BL21中,诱导HPV16型E6、E7蛋白表达,运用SDS-PAGE蛋白电泳检测HPV16 E6、E7蛋白的表达。结果：1.以宫颈癌组织标本中提取的DNA作为模板,PCR扩增反应之后,得到了大小分别约为490bp、310bp的基因片段；2.将重组的克隆质粒pMD 19-T-E6, pMD 19-T-E7和表达质粒pET28a(+)-E6、pET28a(+)-E7测序,测序结果均显示E6基因的253位碱基C253AT突变为T253AT,编码氨基酸由组氨酸突变成酪氨酸,E7基因测序结果与HPV16型E7序列完全一致；3.构建的表达质粒pET28a(+)-E6、pET28a(+)-E7可在大肠杆菌BL21中稳定表达HPV16型E6、E7蛋白。结论：1.成功克隆了HPV16型E6、E7基因；2.成功构建了HPV16型E6、E7蛋白原核表达系统；3.成功诱导HPV16型E6、E7蛋白的原核表达。