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目的：探讨人乳头瘤病毒(HPV)16感染与宿主人类白细胞抗原(HLA)一DRBl、HLA-I~B1等位基因和宫颈癌发病年龄的关系，找出导致宫颈癌患者年轻化趋势的发病原因及其发生的HLA遗传学背景。
方法：收集2005年1月至2005年12月期间在我院和丽水市中心医院治疗的宫颈癌患者65例(435岁31例，>35岁34例)。首先取微量宫颈癌组织，用DNA提取试剂盒提取人类基因组DNA，采用聚合酶链反应(PCR)方法对3l例435岁的年轻宫颈癌患者(实验组即年轻组)和34例>35岁宫颈癌患者(对照组)的手术后的宫颈标本进行HPVl6检测，分析宫颈癌的HPV感染率以及比较两个实验组的HPV感染率。第二步则是采用聚合酶链反应一序列特异性引物法(PCR—SSP)对前述65例宫颈癌标本进行HLA-DRBl，HLA—DQBl基因分型。
结果：
一．宫颈癌患者ItPVl6感染与宫颈癌患者年龄关系
65例宫颈癌患者中共检HPVl6感染25例，HPVl6总感染率为38．5％，其中，年轻组HPVl6阳性者17例，占54．8％，对照组HPVl6阳性者8例，占23．5％，两组间HP~16感染率比较有显著差异(P<0．05)。随着HPVl6感染率升高，宫颈癌患病年龄愈加年轻化，提示HPVl6感染与宫颈癌年轻化有关。
二．HLA-DRBl、DQBl等位基因频率和基因型频率分布
1．所有的患者中，共检出HLA—DRBl12种等位基因，33个等位基因型。等位基因的频率在L5％～2L5％之间，DRBI*04、*09、*11和*12等位基因的频率较高(12．3％，12．3％，13．8％，2L5％)，DRBi*07、*13和*16等位基因的频率较低(3．8％，L5％，1．5％)；检出HLA—DQBl8种等位基因，22种基因型。其中HLA—DQBi*0601和DQBI*0301频率最高，分别为17．7％、33．1％，以DQBi*0306频率最低，仅检出2例，频率为L5％。
2．在年轻组中，检测出Ilia—BRBl11个等位基因和1例DRB4*53基因，共有21种基因表现型，其中DRBi*04、DRBi*09和DRBi*i2的频率最高(17．7％，16．1％，19．4％)；检出8个HLA一DQBl等位基因，16种基因型，检出率最高的是DQBI,0301(35．5％)，最低的是DQBI*0306(1．6％)。在对照组中，也只检测出HLA—DRBln个等位基因，18种基因型，而基因频率最高的是BRBI*12(23．5％)，DRBI*13则未检出；HLA—DQBl检出8个等位基因，18种基因型，检出率最高的也是DQBI*0301(30．9％)，最低的也是DQBi*0306(L5％)。
三．年轻组和对照组HLA-DRBl、DQB1等位基因频率比较
对照组HLA-DQBi*0501等位基因频率与年轻组相比显著性增高(16．2％，L6％，X2=8．209，P=0．004)，OR=11．72(95％CIL473～94．107)，缺失DQBi*0501等位基因的年轻患者与携带此基因的对照组相比，患子宫颈癌的危险性增加近12倍。其它等位基因在两组之间没有显著性差异，但是，虽然HLA—DRBI*04、*09、*11、．12和HLA—DQBi*0601、．0201、*0301在两组之间没有显著性差异，但这些等位基因在所有宫颈癌患者中的表达率特别高，提示这些等位基因可能与宫颈癌的发病有密切的关系。
四．HPVl6感染及HLA多态性与宫颈癌发病年龄的关系
在年轻组17例HPV(+)患者中，HLA—DRBI*12表达显著增高，与组内HPV(一)患者相比有显著性差异(p=--O．027，0R=5．42，95％CIL07—27．27)，在所有的宫颈癌患者中，DRBi*12也高表达(10．7％)，但是与对照组HPV(+)患者相比没有显著性差异(P=0．746)，这说明在携带此等位基因的年轻女性，HPVl6的易感性增加，并且合并HP~16感染后易进一步发展为侵袭性癌症。HLA—DQBl*0201位点在HPV(+)年轻患者中表达率较低，在组内与HPV(一)患者对比有差异(／KO．05，OR=O.00l，95％C10．10一O．793)，与对照组HPV(+)患者DQBI*0201表达相比也有显著性差异(／KO．05，0R=O．067，95％C10．07—0．634)，提示在HPV(+)年轻妇女中HLA—DQBi*0201等位基因与宫颈癌呈负相关，而在年龄较大的HPV(+)患者中HLA—DQBi*020l与宫颈癌呈正相关，但其基因的作用还需要进一步验证。其它等位基因在HPV(+)患者中组内和组间没有显著性差异，但是值得一提的是，HLA—DRBI*04在年轻组HPV(+)的患者中表达率很高(23．2％)，而在对照组HPV阳性患者中则没有检测到DRBI*04的表达，因而认为DRBI*04与年轻女性HPVl6感染有关，且感染后易导致癌变。
五．HLA单倍体和HPV感染与宫颈癌发病年龄的分析
对HLA单倍体的研究发现，两组在表达率上没有统计学意义，但是在感染HPVl6的年轻患者当中，单倍体DRBi*04-DQBi*03表达率为23．5％，而该单倍体在对照组中却没有检测到，与等位基因DRBi*04的表达情况一样。根据文献报道，单倍体DRBi*04-1~BI*03在HPV(+)患者中表达率显著升高，可导致女性HPV易感性增加，本实验的结果与之基本相符。
结论：
1．随着年轻女性HP~16感染率的升高，宫颈癌发病年龄年轻化趋势愈明显，宫颈癌年轻化与HPVl6感染有关。因此，对HPV感染的高危人群应加强监测、随访，作到早诊断、早治疗。
2．年轻女性宫颈癌发病与等位基因HLA—DQBi*0501呈负相关，HLA—DQBi*0501等位基因对年轻女性宫颈癌具有一定的保护作用。
3．在HPV(+)的年轻妇女中HLA—DQBi*020l等位基因与宫颈癌呈负相关，而在年龄较大的HPV(+)患者中HLA—DQBI*0201与宫颈癌呈正相关，但其基因的作用还需要进一步验证。
4．宫颈癌发病年龄年轻化与HLA--DRBI*04，*12等位基因及单倍体HLA—DRBI*04一DQBI*03呈正相关，携等位基因HLA—DRBI*04，*12等位基因或单倍体HLA—DR*04一DQBl*03的女性HPVl6易感性增加，并]5[HPVl6感染持续时间延长，从而增加了宫颈癌发病的危险性，可能是宫颈癌年轻化的主要因素之一。