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呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)是引起婴幼儿下呼吸道感染的重要病因。它可引起一系列的呼吸道疾病,包括鼻炎、中耳炎、支气管炎和肺炎。全球每年感染RSV约64万人,死亡人数高达160,000人。但迄今为止仍无安全有效的疫苗问世。其中一个重要的原因在于接种疫苗后,诱导产生的中和抗体水平不足,更严重的是再感染RSV后,机体的Th1/Th2反应平衡向Th2反应漂移,这造成了严重的肺部嗜酸性粒细胞浸润。研究证明,特异性CTI。反应在抵抗RSV再感染中有着重要作用。众多研究发现,蛋白转导结构域(Cell-penentrating peptides,CPPs)或称穿膜肽(Protein transdu-ction domain,PTDs)具有增强Th1及CTL反应的作用。
本研究在原核表达载体pET-G1F/M2的基础上,构建了一个含有穿膜肽HIV-TAT及RSVG蛋白片段与CTL表位的基因片段的重组表达质粒pET-TAT-GlF/M2。将其导入E.coli BL21(DE3),并成功获得高效表达。重组蛋白采用Ni2+螯合的亲和柱层析的方法,纯化使用尿素变性溶解的包涵体溶液,获得的纯化后的重组蛋白进行梯度透析复性,Western-blot鉴定重组蛋白的RSV特异性。
以铝盐为佐剂,腹腔及皮下免疫Balb/c小鼠,通过ELISA法测定IgG抗体及其亚型IgG1、IgG2a的滴度,CPE法测定中和抗体,MMT法测定体外脾细胞增殖。结果显示,对照蛋白G1F/M2和重组蛋白TAT-G1F/M2均可以诱导高滴度的抗蛋白及抗RSV特异性的IgG抗体、中和抗体、明显的体外脾细胞增殖和强烈的CTL应答。与对照蛋白G1F/M2相比,重组蛋白TAT-G1F/M2诱导产生了更加平衡的IgG1/IgG2a。
如何开发出一种既能诱导有效的细胞免疫又能产生有效的体液免疫的疫苗是当今RSV疫苗研究的热点。本研究采用的HIV-TAT有利于增强候选疫苗诱导CTL应答的能力,平衡Th1/Th2反应。