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目的为探讨细胞复制允许因子Cdtl和复制抑制因子Geminin在白血病细胞中的表达及其与细胞增殖的关系。为白血病的发病机制、诊断治疗和预后判断提供依据。
方法培养白血病细胞系HL-60和K562，并以阿糖胞苷(Ara-C)进行药物干预，观察细胞生长曲线，通过MTT、比色法检测药物干预的细胞抑制率。
实验分为两个部分：(1)HL-60细胞部分，分5组：处于对数生长期的HL-60细胞(A组)；处于饥饿状态的非对数生长期的HL-60细胞(B组);Ara—C药物干预的HL-60细胞(C组)；以正常人外周血粒细胞(D组)和淋巴细胞(E组)作对照组。(2)K562细胞部分，分5组：处于对数生长期的K562细胞(A组)；处于饥饿状态的非对数生长期的K562细胞(B组)；Ara-C药物干预的K562细胞(C组)；以正常人外周血粒细胞(D组)和淋巴细胞(E组)作对照组。收集各组细胞，利用RT-PCR方法检测细胞中Cdtl和Geminin mRNA的表达，进行半定量分析；利用免疫组织细胞化学方法检测细胞中的Cdtl和Geminin蛋白的表达，对细胞阳性表达率进行半定量分析。
结果①正常人外周血淋巴细胞和粒细胞中仅有少量Cdtl蛋白和Geminin蛋白表达，但无明显Cdt1 mRNA和Geminin mRNA表达。②处于对数生长期的K562细胞和HL一60细胞Cdtl mRNA及蛋白的表达、GemininmRNA及蛋白的表达均显著高于对照组(P<0.05)。③处于饥饿状态的K562细胞和HL一60细胞Cdtl mRNA及蛋白的表达、Geminin mRNA及蛋白的表达均较对数生长期细胞显著降低(P<005)。④Ara一C药物干预的K562细胞和HL一60细胞Cdt1 mRNA及蛋白、Geminin mRNA及蛋白表达较对数生长期细胞显著降低(p<0.05)。
结论①白血病细胞系HL-60和K562在对数生长期，Cdt1的表达在基因水平和蛋白质水平显著增高；②采用血清饥饿的方法抑制细胞增殖或Ara-C药物干预可使白血病细胞系HL-60和K562 Cdtl表达下调；③白血病细胞系K562和HL-60在对数生长期，Geminin的表达在基因水平和蛋白质水平显著增高；④采用血清饥饿的方法抑制细胞增殖或Ara-C药物干预可使白血病细胞系K562和HL-60 Geminin表达下调。