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目的:
脑胶质瘤是最常见的原发性颅内肿瘤,约占成人原发性颅内肿瘤35%-60.96%,其中恶性胶质瘤约占30%-60%。尽管目前先进的显微神经外科手术、放疗和化疗等综合治疗手段已广泛应用于临床,但疗效仍不理想,特别是胶质母细胞瘤,即便是接受了最佳治疗,患者的中位生存期也只有12-15个月,其生存期短,预后差,死亡率高。因此,脑胶质瘤仍是神经外科领域的难治之病。要改变现状,研究脑胶质瘤的发生、发展机制,探讨新的有效治疗措施十分必要。
研究发现,脑胶质瘤术后复发或再发的主要原因是肿瘤细胞的侵袭性生长,侵袭周围脑组织。弄清肿瘤侵袭性生长的机制,阻止肿瘤细胞向周围脑组织的浸润是治疗脑胶质瘤的关键之一。实验证明,肿瘤细胞的侵袭性与细胞外基质(ECM)的降解密切和新血管形成等密切相关。近年的研究证实,骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是一种具有多种功能的细胞基质蛋白,有助于多种肿瘤的生长、侵袭和转移,是一种新的肿瘤标记物。本实验通过探讨骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在脑胶质瘤中的表达,分析与脑胶质瘤侵袭性的关系。
方法:
1.MTT法检测U87细胞增殖能力的变化;
2.Transwell体外侵袭实验检测U87细胞侵袭能力的变化
3.实时定量逆转录-聚合酶链反应(Real time-Polymerase Chain Reaction,Real time RT-PCR)检测EGF对U87细胞中OPN mRNA表达水平影响。
4.统计学分析:所有的定量数据用平均值士标准差表示,统计学分析使用SPSS13.0软件进行t检验,以P<0.05认为有统计学意义。
结果:
一、EGF可以使胶质瘤细胞增殖能力增强
对U87胶质瘤细胞进行了MTT实验,我们发现EGF干预后的胶质瘤细胞增殖能力有所提升。
二、EGF可以增强胶质瘤细胞的侵袭能力
对U87胶质瘤细胞进行了Transwell体外侵袭实验,加入EGF处理后,发现U87细胞的侵袭力呈上升趋势。
三、EGF可通过增加OPN的表达,提高胶质瘤细胞增殖侵袭力
对U87胶质瘤细胞进行干预,分不同时间加入不同浓度EGF处理细胞,收集细胞后提取mRNA,进行Real time-PCR反应。证明随着EGF浓度和时间梯度的增加,OPN表达有所增加。
结论:
1、EGF可以促进胶质瘤细胞增殖,增加胶质瘤细胞的侵袭力。
2、EGF可以上调胶质瘤细胞中OPN mRNA表达。
3、EGF可能通过上调OPN表达来增强侵袭能力。