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人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus, HCMV)是一种以业临床性感染或潜伏性感染为主要感染方式的病毒。HCMV能严重危害孕妇和胎儿以及免疫力低下的个体,并且在世界范围内其感染性普遍存在。抗HCMV药物可针对相关性疾病起到阶段性改善作用,但存在毒副作用和耐药性等缺陷,使得抗HCMV疫苗的研发更具有意义。评价抗HCMV疫苗的理想程度是根据其所包含的具有免疫作用的抗原成分。理想的抗原成分可诱导广谱的中和抗体反应和细胞毒性T淋巴细胞反应,对初次感染的预防有显著作用,且对HCMV感染率与发病率有很好的控制效果,并解决了安全性与耐受性的问题。HCMV是一种胞内感染病毒,只有通过细胞免疫才能将其完全清除。常规的预防性疫苗主要是针对未感染的个体,诱导其有效的免疫应答,对已感染的个体不起作用。因此,研发可清除病原体与感染细胞的治疗性疫苗具有更深远的意义。外被磷蛋白65(Phosphoprotein65, pp65)和包膜糖蛋白B(Glycoprotein B, gB)在介导HCMV感染和病毒复制过程中发挥重要的作用,pp65是诱导机体产生细胞免疫的主要抗原,而gB是诱导机体产生体液免疫的主要抗原。本研究将pp65与gB抗原表位基因通过重叠延伸PCR融合,获得融合基因pp65362-504-gB607-621,构建重组表达载体pFLAG-ATS-pp65362-504-gB607-621并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,通过诱导条件的改变未获得可溶性融合蛋白。为了实现融合蛋白的可溶性表达,利用Bac-to-Bac系统进行目的蛋白的表达。本研究构建了一个同时编码报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因和带有6个组氨酸标签片段的融合基因的载体pFastBacTMual-EGFP-pp65362-504-gB607-621,两个基因片段分别控制于p10和PH启动子,双酶切反应和测序验证重组质粒构建正确。将重组质粒转化E. coil DH1OBac发生定点转座产生重组杆粒bacmid-EGFP-pp65362-504-gB607-621,PCR验证其构建正确。采用脂质体转染试剂将重组杆粒转入昆虫细胞系Sf9中,扩增获得的杆状病毒感染Sf9昆虫细胞表达融合蛋白。通过SDS-PAGE和Western Blot对融合蛋白的表达进行检测。结果证明融合蛋白在昆虫细胞可溶性表达并能够与抗体发生特异的反应。