论文部分内容阅读
第一部分
[目的]体外培养大鼠外周血内皮前体细胞(EPCs)，研究细胞体外分离、分化及细胞克隆形态并进行鉴定。观察健康大鼠应用临床推荐剂量的几种血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)培哚普利、雷米普利、福辛普利、卡托普利及血管紧张素受体拮抗剂(ARB)替米沙坦后外周血内皮前体细胞克隆数量、分泌一氧化氮(NO)能力、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达的情况。
[方法]48只健康雄性SD大鼠随机均分为6组，每组8只。1组空白对照，余5组药物干预。给药组每日灌胃分别给予培哚普利(1.33mg/kg)、雷米普利(1.67mg/kg)、福辛普利(6.67mg/kg)、卡托普利(25mg/kg)或替米沙坦(13.33mg/kg)，对照组给予生理盐水，2周后经腹主动脉取外周血密度梯度离心法分离单个核细胞(MNCs)，应用内皮细胞生长培养基(EGM-2)体外培养内皮前体细胞(EPCs)。进行免疫荧光染色及Real-TimePCR鉴定细胞CD34、CD31、CD133、FLk-1、vWF细胞表面标志。检测结合FITC-UEA-1及摄取Dil-acLDL能力。计数细胞克隆，检测细胞培养液上清NO含量。检测细胞eNOS及Caspase-3的蛋白表达水平。
[结果]细胞培养10天后可见不同生长形态细胞克隆，“铺路石样细胞”可稳定传代培养，免疫荧光CD34、CD133、CD31、FLk-1、vWF、UEA-1及acLDL染色阳性，Real-TimePCR检测高表达CD133、FLk-1、CD34、eNOS基因，符合晚期EPCs特点。“紊乱生长细胞”不表达相应标志。与空白对照组相比，药物组形成细胞克隆数均有增多趋势，卡托普利组差异明显(P<0.05)，各药物组间差异无显著性；药物组细胞培养液上清中NO含量亦有升高，与对照组相比雷米普利组、福辛普利组及替米沙坦组差异显著(P<0.05)，各药物组间对比无显著性；Western-Blot检测显示药物组EPCs表达较高浓度的eNOS，较低浓度的Caspase-3蛋白水平；与对照组相比，雷米普利、福辛普利、卡托普利组、替米沙坦组差异达到显著性(P<0.05)，各用药组间对比显示培哚普利组作用偏弱(P<0.05)。
[结论]通过体外分离长时培养可从大鼠外周血获得晚期内皮前体细胞EPCs，事先灌胃给予临床推荐剂量的ACEI或ARB类药物可以增加其克隆数量，提高细胞分泌NO能力，增加其eNOS并降低Caspase-3蛋白水平，各种试验药物间作用略有差异。
第二部分
[目的]观察几种血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)培哚普利、雷米普利、福辛普利、卡托普利及血管紧张素受体拮抗剂(ARB)替米沙坦对正常大鼠用药后血浆细胞因子VEGF、eNOS、TNF-a、vWF、NO水平及心肌eNOS及Caspase-3蛋白表达的影响。
[方法]48只健康雄性SD大鼠随机均分为6组，每组8只，1组空白对照，余5组药物干预，给药组每日灌胃，分别给予培哚普利(1.33mg/kg)、雷米普利(1.67mg/kg)、福辛普利(6.67mg/kg)、卡托普利(25mg/kg)或替米沙坦(13.33mg/kg)，对照组给予生理盐水，2周后取外周血应用ELISA试剂盒检测血浆VEGF、eNOS、TNF-α、vWF的含量，硝酸还原酶法检测血浆NO含量，免疫组化方法观察心肌eNOS表达，免疫荧光方法观察心肌vWF表达，Western-blot分析心肌eNOS及Caspase-3的蛋白表达。
[结果]服药2周后，药物组血浆TNF-α、vWF数值明显下降，较对照组差异显著(P<0.05)，药物组间对比未见明显差异，药物组VEGF有所升高但较对照组均未达到统计意义(P>0.05)。药物组eNOS水平亦有所升高，与对照组比较雷米普利组、卡托普利组及替米沙坦组差异显著(P<0.05)，各药物组间差异无显著性。药物组血浆NO含量有升高趋势，但未达到统计学差异，各组均(P>0.05)。免疫组化方法观察心肌eNOS多在小血管内皮分布，部分在心肌细胞胞膜及胞浆。免疫荧光亦可明确观察到vWF在心肌血管内皮的表达。Western-blot分析药物组心肌eNOS蛋白表达增加，与对照组相比，卡托普利组、替米沙坦组差异达到显著性(P<0.05)，Caspase-3蛋白有所减低，与对照组相比，福辛普利组、替米沙坦组差异达到显著性(P<0.05)。
[结论]正常大鼠灌胃给予ACEI或ARB类药物也可降低血浆TNF-α、vWF水平并提高eNOS的含量，有增加心肌组织eNOS及降低Caspase-3蛋白表达的趋势，各治药物治疗组间作用差异不显著。