有机磷降解菌的分离、降解性能及系统发育研究

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农药按其作用可分为杀虫剂、杀菌剂、除草剂、生长调节剂、驱虫剂等六类,甲基对硫磷(methylparathion,以下简称MP)又称甲基1605,是一类目前广泛使用的高毒有机磷农药,其主要中间代谢产物为对硝基苯酚(ρ-nitrophenol,以下简称PNP),易溶于水,具有中等毒性。由于二者都具有苯环结构,残留期很长,给人类健康造成潜在的威胁。目前发现的MP和PNP降解菌主要有假单胞菌、黄杆菌、产碱菌等,而且大多只能部分降解MP和PNP,国内外尚未发现节杆菌对MP及其降解中间产物PNP的降解。本实验所分离到的三株MP彻底降解菌可实现对MP和PNP的同步高效降解,将二者彻底降解成小分子物质。本试验从生产MP的山东华阳农药厂污水曝气池中,分离到三株能以MP及其降解中间产物PNP为唯一碳源生长,且能够将其降解的细菌X4、L4、X3,经鉴定,均为节杆菌属(Arthrobacter sp.),有明显的球杆变化周期。用气相色谱法和分光光度法对X4、L4、X3的降解性能分析表明:X4在7h内对50mg/L MP和PNP的降解率为99%,20h对甲胺磷的降解率为64%,对毒死蜱的降解率为54%,对克百威的降解率为68%。L4在5h内对50mg/L的MP和PNP的降解率分别为85%和98%,20h内,L4对甲胺磷的降解率为70%,对毒死蜱的降解率为34%,对克百威的降解率为38%。X3在7h内对50 mg/L PNP的降解率为99%,在24h内对100mg/L PNP的降解率为98%。X4和L4在Genbank中的注册号分别为DQ202320和DQ201188。对三株降解菌的生长曲线的研究分别在牛肉膏蛋白胨培养基、含500mg/L MP的牛肉膏蛋白胨培养基、含500mg/L MP和300mg/L PNP的基础培养基上,用比浊法测其OD600的值绘制而成。三株菌在以有机磷农药为唯一碳源的基本培养基上,对MP和PNP的最大耐受浓度分别为1700mg/L和500mg/L,对甲胺磷、毒死蜱和克百威的最大耐受浓度为300mg/L。以上反应的测定条件为:pH值7,温度30℃,接种量30%。并在Genbank中搜索相似序列构建了系统发育树以了解其它菌株与X4、L4之间的亲缘关系。
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