【摘 要】
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枳(Poncirus trifoliata(L.)Raf.)是柑橘重要的砧木,具有较强的抗寒性和抗病性,但其抗旱性较差,研究枳干旱应答机理对于提高其抗旱性具有重要意义。SnRK2(Sucrose non-fermen
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枳(Poncirus trifoliata(L.)Raf.)是柑橘重要的砧木,具有较强的抗寒性和抗病性,但其抗旱性较差,研究枳干旱应答机理对于提高其抗旱性具有重要意义。SnRK2(Sucrose non-fermenting 1-related protein kinases 2,蔗糖非发酵1型相关蛋白激酶2)是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,只存在于植物中,在ABA信号转导路径中扮演关键角色。SnRK2-AREB/ABF在响应逆境胁迫中起着重要作用。以下为主要的研究内容:1、从甜橙数据库中鉴定出7个CsSnRK2成员,并对其理化性质、基因结构、二级结构、C末端、motif和EST等分析,结果表明甜橙CsSnRK2家族为亲水性蛋白。CsSnRK2基因成员含有9个外显子。CsSnRK2成员分为3个亚族,C末端和motif序列分析表明CsSnRK2基因具有较高的保守性。2、利用qRT-PCR分析了枳SnRK2基因的表达模式,结果发现枳SnRK2.4受水分胁迫诱导最为强烈,SnRK2.3、SnRK2.6和SnRK2.10次之,SnRK2.5、SnRK2.7及SnRK2.8几乎不受水分胁迫所诱导;SnRK2.4和SnRK2.5受ABA诱导最为显著,SnRK2.3、SnRK2.6和SnRK2.8次之,而SnRK2.7和SnRK2.10不响应ABA的诱导。同时受干旱和ABA诱导的成员有SnRK2.4、SnRK2.3和SnRK2.6,这三个基因成员很可能属于ABA依赖型基因。3、利用BIFC技术验证枳7个SnRK2成员与转录因子ABF2之间的互作,结果表明枳7个SnRK2基因成员均可与ABF2在细胞核中发生互作。亚细胞定位分析表明枳SnRK2.3和SnRK2.4定位在质膜和细胞核中。此外,原核表达分析结果显示枳SnRK2.4蛋白能够在大肠杆菌BL21中诱导表达。
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