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目的：
体外环境下，研究洛铂对人结肠癌细胞株LoVo细胞增殖的抑制作用及其作用机制，为临床应用洛铂治疗结肠癌提供实验依据。
方法：
体外培养LoVo细胞，采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定对照组（未加药）和洛铂不同时间、不同浓度干预组细胞增殖变化，计算生长抑制率和半数抑制率，找出洛铂体外作用的最佳时间和合适浓度。在最佳时间点，采用MTT法测定洛铂（500umol/L1000umol/L、2000umol/L）干预处理LoVo细胞后细胞增殖的变化，计算生长抑制率和半数抑制率；采用Annexin V-FITC检测洛铂对LoVo细胞诱导凋亡的作用；原位末端标记技术法(TuNEL)检测LoVo细胞的凋亡指数；分光光度法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白(Caspase)-3、8、9的表达；Western Blot检测洛铂干预后Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达情况；流式细胞技术检测细胞周期变化。
结果：
1.MTT结果显示不同时间点，不同浓度的洛铂能明显抑制LoVo细胞的增殖，差异有统计学意义(P<0.05)，洛铂作用LoVo细胞6h、12h、24h、48h、72h的IC50分别是105163±76919.53umoI/L、19406.48±4128.93umol/L、994.44±254.37uml/L、914.85±239.03umol/L、823.13±197.08umol/L，24h、48h与72h的IC50差异无统计学意义(p>0.05），洛铂体外作用的最佳时间为24h。
2.以24h干预时间为前提，不同浓度的洛铂（100umol/L、500umol/L、1000umol/L、2000utmol/L、5000umol/L、10000umol/L）作用于LoVo细胞后，MTT法检测细胞生长抑制率分别为30.96±6.37％、38.51±7.17％、50.73±5.34％、58.13±2.33％、65.49±1.21％、72.59±1.50％。与阴性对照组相比，不同浓度的洛铂对LoVo细胞体外生长均有明显的抑制作用，差异均有统计学意义(P<0.05)，且随着洛铂浓度的提高，细胞抑制率明显增加，呈现剂量依赖关系。洛铂1000±mol/L的作用浓度时，细胞抑制率为50.73％，采用500±mol/L、1000±mol/L及2000±mol/L作为后续实验组浓度。
3.Annexin V-FITC检测结果显示，不同浓度的洛铂(500±mol/L、l000±mol/L、2000±mol/L,5000±mol/L)体外作用于LoVo细胞24h，细胞总凋亡率分别为37.05±1.68％、44.56±1.20％、72.20±0.94％、93.09±2.60％，和阴性对照组相比及实验组间两两比较，差异均具有统计学意义（P<0.05）。
4.TuNEL染色光镜下计数凋亡细胞，不同浓度的洛铂(500±mol/L、1000±mol/L、2000±mol/L)作用于LoVo细胞24h，凋亡阳性细胞数明显增多，细胞凋亡指数分别为37.03±1.73％、53.214±3.00％和82.32±2.00％。和阴性对照组相比较，实验组各组细胞凋亡比例增加，且随着洛铂浓度的增加而增加，差异均有统计学意义（P<0.05）。
5.分光光度法结果显示，不同浓度的洛铂（500±mol/L、1000±mol/L、2000±mol/，）体外作用于人LoVo细胞24h，Caspase-3的活化程度分别为1.670±0.061、2.913±0.112、4.252±0.069;Caspase-8的活化程度分别为1.706±0.061、2.498±0.054、2.874±0.121;Caspase-9的活化程度分别为1.955±0.110、2.600±0.177、2.836±0.163。与对照组相比，实验组Caspase-3、8、9活度增加，差异均有统计学意义(P<0.05)。
6.Western Blot检测结果显示，洛铂1000umol/L作用于LoVo细胞24h，Bax、Caspase-3和Bcl-2蛋白表达分别为0.605±0.013、0.602±0.026、0.293±0.018，而阴性对照组的蛋白表达分别为0.305±0.013、0.398±0.017、0.596±0.021。和阴性对照组相比，洛铂1000umol/L作用于LoVo细胞24h，Bax和Caspase-3表达明显增加，而Bcl-2的表达明显减少，差异均具有统计学意义(p<0.05)。
7.流式细胞术检测结果显示，不同浓度的洛铂(500umol/L、10001umo1/L、2000umol/L)作用于LoVo细胞24h，S期的细胞比例分别为29.99±2.09％、38.29±1.00％、41.14+1.78％，G2/M期的细胞比例分别为13.84±0.44％、9.42+1.06％、2.85+0.13％，并且DNA直方图上出现二倍体峰减少，GI峰左侧出现亚二倍体细胞群（亚GI峰），而在光散图谱上，出现低于正常的前向散射和较高的侧射，亚GI峰分别为7.04+90.21％、41.96±1.81％、70.66±1.03％，各组间差异均有统计学意义(p<0.05)。和阴性对照组相比，S期细胞比例增加，G2/M期细胞比例减少，差异均有统计学意义（P<0.05）；且随着浓度的提高，这种趋势更为明显，差异均有统计学意义(P<0.05)。
结论：
1.洛铂体外能明显抑制人结肠癌细胞株LoVo的增殖，呈浓度及时间依赖性，洛铂作用LoVo细胞的最佳时间为24h。
2.体外实验法证实洛铂体外作用人结肠癌细胞株LoVo细胞24h后，能明显诱导LoVo细胞凋亡，表现为剂量依赖性，其作用机制可能与下列因素有关：通过Caspase-8和Caspase-9活化，并分别进一步激活Caspase-3诱导LoVo细胞凋亡，即可能通过线粒体途径和死亡受体途径共同诱导细胞凋亡；抑制LoVo细胞Bcl-2表达，激活Bax表达，洛铂介导的凋亡途径可能与线粒体通路Bcl-2(bax)-Caspase信号传导有关；诱导LoVo细胞细胞周期S期阻滞，促进细胞凋亡。