【摘 要】
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该文采用DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析和SephacrylS-200HR凝胶过滤层析纯化大肠杆菌(E.coli p20KLT)表达的重组人β肿瘤坏死因子(rhTNF-β).初步纯化的rhTNF-β经蛋白电
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该文采用DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析和SephacrylS-200HR凝胶过滤层析纯化大肠杆菌(E.coli p20KLT)表达的重组人β肿瘤坏死因子(rhTNF-β).初步纯化的rhTNF-β经蛋白电泳显示,在分子量18KD左右有明显条带;比活性达到3.0x10<6>u/mg,回收率约为67%.用[<3>H]-TdR掺入法,证实rhTNF-β对HL-60,NS-1,YAK等肿瘤细胞的增殖有明显的抑制作用,显示了较强的细胞毒效应.实验进一步观察了rhTNF-β诱导肿瘤细胞NS-1和U-937凋亡的作用.DNA琼脂糖电泳和电镜观察显示,在放线菌酮(CHX)和rhTNF-β共同作用下,NS-1细胞发生了典型的凋亡现象:DNA电泳后呈"阶梯状"条带,电镜观察显示细胞表面平滑化,微绒毛消失,核染色质凝缩呈新月形并凝聚在核膜周边;内质网膨胀,胞浆内细胞器聚集,并有凋亡小体出现.而U-937则没有出现典型的凋亡变化.作者还用流式细胞仪分析rhTNF-β对NS-1和U-937细胞周期的影响,发现NS-1细胞Go/G<,1>期百分率下降,而S/M期百分率升高;U-937细胞在rhTNF-β作用下,细胞周期则不发生变化.实验说明,rhTNF-β可能通过对肿瘤细胞的S期的作用,使NS-1细胞发生凋亡.
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