【摘 要】
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目的： 1．明确Pin1启动子多态性与广东地区鼻咽癌发病风险的关系。 2．明确Pin1启动子多态性与鼻咽癌各临床因素的关系。 3．观察鼻咽癌中Pin1启动子多态性是否参与Pin1表
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目的： 1．明确Pin1启动子多态性与广东地区鼻咽癌发病风险的关系。 2．明确Pin1启动子多态性与鼻咽癌各临床因素的关系。 3．观察鼻咽癌中Pin1启动子多态性是否参与Pin1表达调控。 4.筛选并鉴定出参与Pin1表达调控的转录因子。 方法： 1．RFLP方法检测Pin1启动子两个SNP位点（即-842G>C，rs2233678和-667C>T，rs2233679）的基因型，并随机抽取一定比例（约10%）的样品用测序的方法进行结果验证。采用卡方、logistic回归等统计分析Pin1启动子多态性与鼻咽癌发病风险的相关性。应用卡方、Cox回归等模型，分析Pin1启动子多态性与各临床因素的相关性。单倍型分析Pin1启动子多态性与鼻咽癌发病风险的相关性。 2．构建含不同多态性基因型的Pin1启动子荧光素酶报告基因载体，转染鼻咽癌细胞CNE2，明确启动子多态性参与Pin1表达调控。 3．用平板克隆、免疫组化、qRT-PCR和Western blot等方法检测预期转录因子和Pin1的表达。 结果： 1. Pin1启动子区两位点（-842G>C和-667C>T）的基因型、等位基因、单倍体频率与鼻咽癌的发病风险均存在相关关系，而与各临床因素未发现相关关系。 2.双荧光素酶检测结果显示，变异体-842C-667C和-842G-667T报告基因的活性均高于野生型-842G-667C的表达，而变异体-842C-667T报告基因的活性与野生型相比无明显差别。 3. qRT-PCR实验结果显示，在mRNA水平，低表达AP2α后Pin1的mRNA表达明显降低。 4. Western blot实验结果显示，干扰AP2α后Pin1的蛋白水平也随之下降。 5.免疫组化分析结果显示，AP2α与Pin1在鼻咽癌组织中的表达存在正相关关系。 6.平板克隆形成实验结果显示，AP2α、Pin1单独沉默与对照组比细胞克隆数明显减少，两者同时沉默后，克隆形成减少更加明显。 结论： 1.在广东地区，Pin1启动子两个SNP位点与鼻咽癌的发病风险存在相关关系，此两位点可能是鼻咽癌发生的分子标志。 2. Pin1启动子多态性参与Pin1表达调控，AP2α与Pin1可能存在调控关系。
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