人工栽培及野生七叶一枝花抗肝癌作用及其机制

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目的:通过体内实验对陕西地区野生七叶一枝花抗肝癌作用加以验证;分别采用肝癌H22小鼠、人肝癌SMMC-7721裸鼠模型,探讨陕西地区人工栽培及野生七叶一枝花体内抗肝癌活性及机制的差异。为发展当地七叶一枝花人工栽培产业提供必要的科学实验基础。  方法:  ①野生七叶一枝花对肝癌H22小鼠实体瘤的抑制作用:建立肝癌H22小鼠模型,实验分为模型组,环磷酰胺(CTX)组,野生品(YS)高、中、低(2.46、1.23、0.615 g/kg)组,连续给药14d后,取瘤体称重计算抑瘤率。实验重复三批。  ②野生七叶一枝花对肝癌H22腹水瘤小鼠生存期的影响:建立肝癌H22腹水瘤小鼠模型,分组给药同实验一,观察并记录生存时间。实验重复三批。  ③人工栽培及野生七叶一枝花对肝癌H22小鼠实体瘤的抑制作用及免疫功能的影响:建立肝癌H22小鼠模型,实验分为模型组,CTX组,人工栽培品(RG)高、中、低(2.46、1.23、0.615 g/kg)组。野生品(YS)高、中、低(2.46、1.23、0.615 g/kg)组。实验重复三批。连续给药14d后,摘眼球取血,ELISA法测定血清中IL-2、TNF-a、NK的活性。取瘤体、胸腺和脾脏称重,计算抑瘤率、胸腺和脾脏指数。  ④人工栽培及野生七叶一枝花对人肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤的抑制作用:建立人肝癌SMMC-7721裸鼠模型,实验分为模型组,CTX组,RG高、低(2.46、0.615g/kg)组,YS高、低(2.46、0.615 g/kg)组。连续给药20d。记录肿瘤体积,计算相对肿瘤体积(RTV)及相对肿瘤增殖率(T/C%),取瘤体称重计算抑瘤率、绘制出肿瘤生长变化曲线。实验重复两批。  ⑤人工栽培及野生七叶一枝花对人肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤细胞凋亡、细胞周期及诱导凋亡蛋白的作用:取裸鼠移植瘤组织,采用流式细胞术(FCM)检测人工栽培品及野生品对SMMC-7721荷瘤裸鼠移植瘤细胞周期和细胞凋亡的影响,蛋白印迹法(Western blot)检测SMMC-7721荷瘤裸鼠移植瘤中Bcl-2、Bax、Fas、Fas-l蛋白水平的表达情况。  结果:  ①YS品高中低组小鼠平均瘤重均明显低于模型组(P<0.01),平均抑瘤率分别为53.8%、44.8%、32.6%,并存在剂量关系。  ②YS品高中低组小鼠生存时间较模型组明显延长(P<0.01),平均生命延长率分别53.2%、41.3%、31.3%,存在剂量依赖性。  ③RG品与YS品各组小鼠平均瘤重均明显低于模型组(P<0.01或P<0.05),分别呈组间剂量依赖性,同剂量RG组与YS组抑瘤作用无明显差异;RG-H、M、YS-H组小鼠胸腺指数明显升高(P<0.01或P<0.05),同剂量RG组与YS组比胸腺指数无明显差异;RG品与YS品对H22荷瘤小鼠脾脏指数无影响;RG与YS均能显著提高H22小鼠血清中NK含量(P<0.01或P<0.05),同剂量RG品与YS品血清中NK含量无明显差异。  ④RG品与YS品相对肿瘤体积变化明显低于模型对照组(P<0.01或P<0.05),末次相对肿瘤增殖率T/C(%)分别为35.1%、47.4%、39.9%、64.5%。RG品与YS品均能明显抑制裸鼠移植瘤生长,同剂量RG组与YS组对裸鼠的移植瘤生长作用无明显差异。  ⑤RG品与YS品G0/G1期细胞比例明显增加(P<0.01或P<0.05),同剂量RG品与YS品各组无明显差异;RS品和YS品各组总凋亡率分别为67.9%、60.0%、60.5%,44.1%,较模型组明显增加(P<0.01或P<0.05),同剂量RG品与YS品无差异;RG品与YS品均能下调Bcl-2蛋白的相对表达量(P<0.05),上调Fas、Fas-L蛋白相对表达量(P<0.05),且同剂量RG组和YS组的蛋白相对量表达无明显差异。  结论:  ①YS品对肝癌H22小鼠实体瘤有明显抑制作用。  ②YS品能显著提高肝癌H22腹水瘤小鼠的生存时间。  ③RG品和YS品均对肝癌H22小鼠实体瘤有明显抑制作用,增强小鼠胸腺功能,提高动物NK活性,两者之间作用无明显差异。  ④RG品和YS品均能明显抑制人肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤的生长,且两者对SMMC-7721裸鼠移植瘤抑制作用无明显差异。  ⑤RG品与YS品均通过阻滞癌细胞于G0/G1期,下调Bcl-2蛋白表达水平,上调Fas、Fas-L蛋白表达,发挥抗肿瘤作用机制,诱导细胞凋亡,且两者的作用机制无明显差异。
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