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近年来，人们发现了肾素-血管紧张素系统(renin angitensin system，RAS)中另一活性物质：肾素（前体）受体。目前人们克隆出两种肾素（前体）受体，一种是6-磷酸甘露糖/Ⅱ型胰岛素样生长因子受体(mainnose-6-phosphate/insulin-like growth factorⅡ receptor, M6P/IGF2R)，被人们认为在肾素（前体）的清除机制中发挥重要作用。另一种是功能型受体：肾素（前体）受体[(pro)renin receptor，(P)RR]。(P)RR在心肾疾病中的作用越来越受到人们的关注，现已证实其存在于肾系膜细胞、血管平滑肌细胞、肾脏、心脏及大脑等细胞组织中。该受体与肾素（前体）结合后，可以通过不依赖于传统的血管紧张素Ⅱ(Angiotensin-Ⅱ， Ang-Ⅱ)途径，激活细胞内信号转导通路，上调某些基因的表达。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases， MAPKs)是细胞内的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，其存在于大多数细胞内，可将细胞外刺激信号转导至细胞及其核内，并引起细胞生物学反应（如细胞增殖、分化、转化及凋亡等），哺乳动物细胞中已鉴定的3个主要的MAPK亚族包括：细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase1 and2，ERK1/2)亚族，p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPKs)亚族和c-Jun氨基末端激酶(JNK)亚族，其中细胞外信号调节激酶ERK1/2及p38 MAPKs信号转导通路在炎症和氧化应激中起重要作用。本课题组前期工作已证实(P)RR存在于人脐静脉内皮细胞中(human umbilical vein endothelian cells， HUVECs)，而(P)RR在HUVECs中对炎症因子VCAM-1和氧化应激指标SOD的影响及干扰(P)RR表达是否可抑制(P)RR对VCAM-1及SOD的影响尚无报道，(P)RR致炎症反应及氧化应激作用是否与信号通路ERK1/2及P38 MAPKs有联系还不清楚。
目的：在体外培养的HUVECs中，观察肾素（前体）激活(P)RR及干扰(P)RR后对ERK1/2及p38 MAPKs信号通路蛋白表达、血管细胞间粘附分子(vascular cell adhesion molecule-1， VCAM-1)蛋白表达及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase， SOD)浓度的影响，从而探讨其致HUVECs损伤的机制，阐述其与动脉粥样硬化(atherosclerosis， AS)等伴有血管内皮损伤性心血管疾病的关系。
方法：
1．体外培养原代HUVECs，CD34流式细胞鉴定。
2．在HUVECs中以siRNA干扰(P)RR，用RT-PCR方法检测干扰24，48及72小时后(P)RR的mRNA表达，确定干扰效率最佳时间点。
3．以奥美沙坦和PD123319阻断Ang-Ⅱ受体AT1、AT2。分别以人重组肾素(renin)及肾素前体(prorenin)处理HUVECs，于处理后5，10，20，35，60，90分钟收取蛋白，用western blot法检测ERK1/2及p38信号通路蛋白磷酸化程度，确定肾素及其前体刺激致两信号通路蛋白磷酸化的最强时间点。
4．以奥美沙坦和PD123319处理HUVECs30分钟后，分别以人重组肾素及肾素前体刺激HUVECs，分别用western blot法，ELISA法和比色法观察肾素及其前体是否可使信号通路蛋白ERK1/2及p38磷酸化增强、粘附分子VCAM-1表达增高、抗氧化酶SOD含量降低，以及干扰(P)RR表达后是否可阻断或减弱肾素及其前体的上述作用。
结果：
1.CD34流式细胞鉴定，HUVECs百分率达98.35％。
2.RT-PCR结果证实(P)RR的mRNA在HUVECs中有表达，siRNA干扰(P)RR后72小时，(P)RR mRNA在HUVECs中表达最弱。
3.经肾素前体及肾素处理HUVECs后，信号通路蛋白ERK1/2及p38磷酸化水平增强，在肾素作用于细胞后20分钟，ERK及p38磷酸化程度最强；分别在肾素前体作用于细胞后60分钟及35分钟，ERK及p38磷酸化最强。
4.人重组肾素及肾素前体刺激HUVECs，可增高信号通路蛋白ERK1/2及p38磷酸化水平，上调粘附分子VCAM-1表达，降低抗氧化酶SOD含量。干扰(P)RR后上述作用减弱。
结论：
(P)RR存在于HUVECs中。在HUVECs中，肾素及其前体通过(P)RR途径可减少抗氧化酶SOD含量，同时激活ERK1/2及p38 MAPKs信号通路，上调炎症因子VCAM-1蛋白表达，从而引起内皮细胞损伤，导致AS等相关疾病的发生。干扰(P)RR表达，可有效抑制以上作用，发挥内皮保护作用，为临床治疗RAS过度激活所致的伴有内皮损伤的疾病提供新的理论依据。