维生素C促进小鼠体细胞重编程

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:masonma
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在体细胞重编程过程中细胞能量代谢发生改变。外源Sox2、Kff4、Oct4和cMyc感染小鼠成纤维细胞后,激活ALDOC,HK2,GLUT1,GLUT3,ENO2,GPI1,PKM2,PDK1等很多糖酵解代谢酶的表达。SKO和SKOM诱导的重编程过程中糖酵解速率都增加,而SKO组合的细胞内ROS大量积累,线粒体大小、线粒体膜电势和线粒体内琥珀酸脱氢酶活性在SKO组合诱导的重编程前期均显著高于对照细胞和SKOM诱导的重编程细胞,说明SKO不但提高了糖酵解活性而且增加了线粒体内氧化磷酸化代谢活性;而SKOM组合在提高糖酵解速率同时抑制线粒体内氧化磷酸化过程,因而只有很少量的ROS产生。在培养基中添加NAC,Vitamin C,GSH,Lipoic acid等很多种的抗氧化剂,这些化合物均能够降低ROS水平,但是这些化合物中只有Vc能够促进重编程过程,重编程的效率是对照的大约100倍,而且还能够促使iPS克隆更快出现。Vc对于重编程的促进作用具有浓度效应,在5-10微克每毫升的范围内时随着浓度的增高重编程效率也越高,但是在10-100微克每毫升浓度范围时,浓度的进一步提高对重编程没有更高的提升。   Vc与DHA在细胞内能够相互转化,在培养基中添加同样量的Vc和DHA都能够降低ROS水平,但是只有Vc能够促进重编程   Vc能够延长小鼠成纤维细胞体外培养的生长时间,延缓细胞衰老,促进细胞生长,其他受测的抗氧化剂没有这些功能。Vc对于p53和p21的mRNA表达没有任何抑制作用,但是却能够降低他们的蛋白表达水平。应用发卡shRNA技术抑制p53表达,重编程效率大概是对照的约100倍,在培养基中添加维生素C时重编程效率也是对照的大约100倍;两者一起应用时,对于重编程的促进作用能够进一步的提升,大约只有2倍左右。过表达p53时,随着表达量的增加,其对重编程的抑制作用也越强烈,同时添加维生素C也不能完全抑制p53的效果,这些结果说明维生素C对于重编程的促进作用不仅仅足通过降低p53蛋白的水平来实现,还有其他的促进机制。
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