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美洲商陆抗病毒蛋白(pokeweedantiviralproteins，PAPs)，是在美洲商陆(Phytolaccaamercana)的不同组织或不同生长阶段生成的一类具酶功能的单链核糖体失活蛋白(ribosome-inactivatingproteins，RIP)，是天然的广谱抗病毒生物活性物资(试剂)，能抗多种植物和动物病毒。成熟的PAP有262个氨基酸，具有不同的功能区域。现已证明的主要有2个：一个位于成熟PAP蛋白的N端170-183个氨基酸处，其主要功能是对病毒产生抗性；另一个位于C-末端1-25个氨基酸处的区域，主要功能与脱去rRNA的特异位点的腺嘌呤有直接关系，能对寄主产生毒性，而与对病毒抗性无关。获得对寄主减少或丧失毒性，但不降低或使其提高抗病毒活性的PAP重组蛋白，对其在医药领域的深入应用研究具有重要的意义。
本文主要工作是通过对PAP蛋白C-末端编码基因的缺失突变，利用原核细胞表达系统对该突变基因进行高水平表达，并对表达的重组蛋白进行了免疫学鉴定：
1)、本实验从成熟的美洲商陆抗病毒蛋白PAP基因中克隆了C端缺失23个氨基酸的基因PAP-C23，以PET101为表达载体构建了重组质粒，转化入大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析结果表明，目的蛋白在BL21(DE3)中获得表达，表达产物以不溶的包涵体形式存在。通过对表达条件的优化，发现在IPTG终浓度为0.4mmol/L时，37℃诱导4小时，重组蛋白的表达量最高，可占总包涵体蛋白的29.6％，获得了高水平的表达。
2)、用KCL溶液染SDS-PAGE胶，切下表达的目的蛋白，冰浴研磨后用磷酸缓冲液溶解，再加入等体积的福氏不完全佐剂，乳化完全后，免疫家兔，制备抗PAP蛋白的多克隆抗体，间接ELISA法测定所制备的抗血清的效价为1:1000。Westernblot分析结果显示，该制备的抗血清与表达的PAP-c23重组蛋白和天然的PAP蛋白均发生特异性的免疫反应，表明成功获得PAP蛋白的特异抗血清，同时也进一步证明了PAP-c23基因在大肠杆菌中得到了正确表达，这将为大量生产PAP蛋白以直接应用于体外防治病毒病害，以及利用对寄主植物无毒的缺失型PAP基因进行抗病毒基因工程提供目的基因奠定基础。