【摘 要】
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目的采用Taqman探针技术,建立荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR),对前列腺疾病患者外周血中的前列腺特异性抗原基因(PSAmRNA)进行定量检测并开展初步临床应用.方法1.在P
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目的采用Taqman探针技术,建立荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR),对前列腺疾病患者外周血中的前列腺特异性抗原基因(PSAmRNA)进行定量检测并开展初步临床应用.方法1.在PSA基因的外显子2和3之间设计一对引物和一条Taqman探针,优化反应体系,建立PSAmRNA的FQ-RT-PCR方法;2.从不同含量LNCaP细胞中提取mRNA进行FQ-RT-PCR扩增,以相应的循环阈值(Ct值)制作标准曲线,用于确定前列腺疾病患者外周血中PSAmRNA含量;3.用PUCm-T载体与普通PCR扩增所得的PSAcDNA片段进行连接反应,制备重组质粒进而转化感受态细胞DH<,5α>并进行克隆,经测序分析为特异性扩增片段;4.对本方法进行方法学评价,包括探针稳定性,特异性,线性,精密度等等,并收集前列腺疾病患者外周血标本,检测PSAmRNA含量进行初步临床应用评价.
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