论文部分内容阅读
为研究干旱胁迫下柽柳基因的表达,以干旱处理下的柽柳为tester,以正常生长条件下的柽柳为driver,利用SSH(抑制性消减杂交)技术分别构建了干旱胁迫处理的刚毛柽柳根部消减cDNA文库和多枝柽柳叶部消减cDNA文库。 对刚毛柽柳根部消减cDNA文库的分析。随机挑取刚毛柽柳文库中的192个阳性克隆进行测序,共获得125条高质量的序列,其GenBank登录号为CN121095～CN121219。BLASTX分析结果表明,有17个与已知抗旱基因相关的EST,其中包括Mn-SOD、myb相关蛋白、锌指蛋白等。 对多枝柽柳叶部消减cDNA文库的分析。随机挑取多枝柽柳文库中的384个阳性克隆进行测序,共获得347条高质量的序列,GenBank登录号为CV794679～CV795025。利用NCBI的BLASTX程序进行同源性比较和功能分析。结果表明,有144个EST与已知功能的基因序列相似,24个与未知功能的基因相似,179个未能发现相似序列,可能为新基因。将与已知基因具有序列相似性的168个EST按预测功能分为13类,其中新陈代谢和光合作用涉及的基因表达丰度最高,分别为16.7%、14.9%。共获得的88个与抗旱相关的EST,代表了67个单一的基因序列,将其按预测功能分为11类:光合作用、信号传导、防御、代谢、活性氧清除、蛋白质降解、膜流动、蛋白质合成、渗透调节剂合成、膜转运和转录调控。分析结果表明,与光合作用、信号传导、防御、代谢和活性氧清除等功能相关的基因表达丰度最高,分别为11.31%、8.93%、7.74%、7.74%和7.14%,提示此类基因在柽柳抵抗干旱胁迫过程中起到了重要作用。 获得的重要抗旱相关基因主要有:钙依赖蛋白激酶3 (calcium-dependent protein kinase3)、钙调蛋白(calmodulin); Mn-SOD(manganese superoxide dismutase)、谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase);脱水诱导蛋白(RD22 dehydration-responsive protein RD22)、干旱诱导蛋白1 (drought-induced protein 1);真核生物翻译起始因子5A-2(eukaryotic translation initiation factor 5A-2)、泛素交联酶(ubiquitin-conjugating protein);苹果酸脱氢酶(Malate dehydrogenase)、硫-腺苷甲硫氨酸合成酶(S-adenosylmethionine synthetase)等。