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目的通过体外培养小鼠成纤维细胞C3H10T1/2模拟干细胞,采用慢病毒干预使C3H10T1/2细胞中Hey1基因分别过表达和抑制表达,然后使用含骨形态发生蛋白9(BMP9)的条件培养基模拟诱导成骨分化,探讨Notch信号通路重要靶点Hey1表达水平改变对BMP-9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化与增殖的影响。方法构建过表达Hey1慢病毒LV-Hey1、抑制Hey1表达慢病毒LV-sh Hey1,分别感染C3H10T1/2细胞,以LV-Blank(空质粒)感染C3H10T1/2细胞作为对照组;使用荧光显微镜对慢病毒感染的效果、实时荧光定量PCR和Western blot对Hey1表达水平进行验证,筛选出不同Hey1表达水平的稳定C3H10T1/2细胞系。对已改变Hey1表达水平的C3H10T1/2细胞用含BMP-9的条件培养基诱导,分别为以下三组BMP-9+C3H10T1/2组、BMP-9+C3H10T1/2-Hey1组、BMP-9+C3H10T1/2-sh Hey1组,然后以正常培养基培养的细胞作为对照(C3H10T1/2组、C3H10T1/2-Blank组)。培养后48 h后,实时荧光定量PCR及Western blot测定成骨分化相关转录因子Runx2、骨桥蛋白、骨钙素m RNA及蛋白表达水平;4、5、6、7 d行MTT检测及4、5、10 d行流式细胞仪测定细胞增殖能力;4、7 d时ELISA测定细胞ALP表达水平并行染色观察。结果不同Hey1表达水平的C3H10T1/2稳定细胞系成功建立。成骨方面,各时间点与BMP-9+C3H10T1/2组比较,BMP-9诱导下Hey1过表达的BMP-9+C3H10T1/2-Hey1组细胞Runx2、骨桥蛋白osteopontin、骨钙素osteocalcin m RNA及蛋白表达水平、成骨分化标志物ALP含量均显著增加(P<0.05),抑制Hey1表达的BMP-9+C3H10T1/2-sh Hey1组细胞以上指标均显著降低(P<0.05)。对细胞增殖活力影响方面,与BMP-9+C3H10T1/2组比较,BMP-9+C3H10T1/2-Hey1组MTT检测吸光度(A)值及细胞G2+S期百分比均提高(P<0.05);而抑制Hey1表达BMP-9+C3H10T1/2-sh Hey1组以上指标均降低(P<0.05)。结论Hey1表达是BMP-9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化过程中的重要环节,过表达Hey1呈现成骨分化协同效应,同时促进细胞早期增殖,抑制Hey1表达对细胞的成骨分化与增殖效应均呈现很强的拮抗效应。