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目的:
宫颈癌是全球妇女中仅次于乳腺癌的第2个最常见的恶性肿瘤。在一些发展中国家妇女中其发病率仍居第1位。人乳头瘤病毒持续感染是宫颈癌及癌前病变发生发展的关键，HPV DNA整合到宿主细胞染色体DNA上是病毒在体内稳定存在并维持持续感染的重要形式。虽然如此，HPV感染普遍存在，在有性生活女性的一生中，HPV感染率高达80％，但包括高危型在内的80％以上的HPV感染可在6-12个月内即可被宿主清除[1]。因此单纯HPV感染并不一定引起宫颈癌的发生，还可能与肿瘤局部的抑制性免疫微环境有关。肿瘤微环境是指肿瘤发生发展的局部细胞环境，其细胞组成包括肿瘤相关巨噬细胞，抑制性树突状细胞以及调节性T细胞等多种具有免疫功能的细胞[2]。调节性T细胞是肿瘤微环境中的重要组成成分，也是CD4+T辅助细胞中的特殊系别，其功能并非激活免疫系统而是抑制免疫系统功能，从而能够调节免疫耐受。CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在维持机体免疫自稳、调控免疫应答方面具有重要的作用，Foxp3在一定程度上反映了Treg细胞的水平，被认为是目前CD4+CD25+Treg最具特征性的表面分子标志物。既往对Treg在宫颈癌方面的研究主要集中于在外周血研究Treg的相关细胞因子，很少关注与HPV的关系，目前国内外关于宫颈癌中Treg与HPV16存在状态的关系还未有报道。本研究采用多重实时PCR技术检测HPV16型DNA的体内存在状态，采用免疫组化方法检测Foxp3+调节性T细胞表达，分析Treg与HPV存在状态之间的关系及Treg活化与整合状态宫颈癌之间的关系，探讨Treg活化与HPV持续感染及其所致宫颈癌发生发展之间的关系。
方法：
所有患者HPV16型感染阳性，分为宫颈鳞癌（CC=60例），宫颈上皮内瘤变（CIN=65例），对照组（慢性宫颈炎=17例）。采用多重实时PCR技术检测宫颈脱落细胞的E2和E6基因，通过E2/E6比值法评估HPV16型DNA的体内存在状态（纯粹游离型、纯粹混合型、纯粹整合型），采用免疫组化(SP)方法检测宫颈组织中Foxp3+调节性T细胞表达，分析Treg与HPV存在状态之间的关系及Treg活化与整合状态宫颈癌之间的关系。采用SPSS17.0软件进行统计学处理。计数资料问比较采用（行x列表）x2检验;计量资料用均数±标准差（(x)±s）表示，两个样本均数的比较采用两样本t检验，多样本均数的比较采用单因素方差分析，P＜0.05有统计学意义。
结果：
1.HPV16DNA整合型检出率随宫颈病变的严重程度升高而升高。在慢性宫颈炎、CIN1、CIN2、CIN3、CC组整合率分别为11.76％(2/17)、11.11％(2/18)、29.41％(5/17)、43.33％(13/30)、61.67％(37/60)。整合率在试验组与对照组之间比较有统计学意义(x2=7.054，P=0.008)，在CC组与CIN2-3组之间比较有统计学意义(x2=5.762，P=0.016)，在C1N2-3与CIN1组之间比较有统计学意义(x2=4.516，P=0.034)，在CIN1与对照组之间比较无统计学意义(x2=1.000，P＞0.05)。
2.Foxp3阳性检出率随宫颈病变的严重程度升高而升高。在17例慢性宫颈炎组，Foxp3+阳性为0例，阳性率(0％);在65例CIN组，Foxp3+阳性为28例，阳性率(43.08％);在60例CC组，Foxp3+阳性为43例，阳性率(71.67％); Foxp3+阳性率表达在CIN组与对照组之间比较有统计学意义(x2=11.120，P=0.001)，在CC与对照组之间比较有统计学意义（x2=27.592，P=0.000），在CC与CIN组之间比较有统计学意义(x2=10.393，P=0.001)，CIN1-C1N3组表达虽逐渐升高，但每两组间比较无统计学意义(P＞0.05);
3.Foxp3+在HPV16整合型组积分光密度值为39.841±16.719，明显高于游离型组(28.332±6.176)，具有统计学意义（t=-3.371，P=0.001）。
4.Foxp3+积分光密度值在HPV16游离状态、整合状态宫颈组织中，均随着宫颈病变严重程度增加而升高。在CC与CIN3组比较有统计学意义(P＜0.05)，在CIN1-CIN3组表达虽逐渐升高，但每两组间比较无统计学意义(P＞0.05)。在同一病变中，整合型组Foxp3+表达均高于游离型组，在CC组比较有统计学意义（t=-2.685，P=0.010），在CIN组比较无统计学意义(P＞0.05)。
5.Foxp3+在整合状态的宫颈癌中的表达强度与其临床分期、分化程度及淋巴结转移相关，与年龄无关。在Ⅱ期整合状态宫颈癌中，Foxp3+积分光密度值为51.257±16.458，明显高于Ⅰ期整合状态宫颈癌组(35.727±11.889)，有统计学意义（t=-3.050，P=0.005）。在中分化整合状态宫颈癌组，Foxp3+积分光密度值为45.996±15.074，明显高于高分化整合状态宫颈癌组(26.078±5.761)，有统计学意义（t=-4.396，P=0.004）。而低分化组与中分化组差异不显著(P＞0.05)。有淋巴结转移整合状态宫颈癌中，Foxp3+积分光密度值为51.610±13.327，明显高于无淋巴结转移整合状态宫颈癌组(39.786±17.037)，有统计学意义（t=-2.166，P=0.039）。本次研究未发现Foxp3+表达与整合状态宫颈癌患者年龄有关(P＞0.05)。
结论：
1.HPV16DNA整合型检出率及Foxp3阳性检出率均随宫颈病变的严重程度升高而升高。
2.Foxp3+在HPV16DNA整合型组表达明显高于游离型组(P＜0.05)，Foxp3+与HPV16DNA存在状态密切相关。
3.Foxp3+积分光密度值在HPV16游离状态、整合状态宫颈组织中，均随着宫颈病变严重程度增加而升高。
4.Foxp3+在整合状态宫颈癌中的表达强度与其临床分期、分化程度及淋巴结转移相关(P＜0.05)，与年龄无关(P＞0.05)。