【摘 要】
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目的:研究hIL-24基因重组的真核表达质粒pcDNA3.0-hIL-24在CHO细胞中的表达产物和原核表达质粒pET-21a(+)-hIL-24在大肠杆菌中高效表达的产物经部分纯化、复性后的rhIL-24蛋
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目的:研究hIL-24基因重组的真核表达质粒pcDNA3.0-hIL-24在CHO细胞中的表达产物和原核表达质粒pET-21a(+)-hIL-24在大肠杆菌中高效表达的产物经部分纯化、复性后的rhIL-24蛋白对胃癌细胞(SGC7901)及胃癌裸鼠模型的抗肿瘤效应及其分子机理。方法:应用苏州大学医学院细胞和分子生物学教研室构建的pUC19-hIL-24和质粒pcDNA3.0,构建出高效的真核表达载体pcDNA3.0-hIL-24。鉴于中国仓鼠卵巢细胞CHO的表达特性,我们将真核表达载体pcDNA3.0-hIL-24转染CHO细胞,使rhIL-24在其中稳定、高效的表达。pcDNA3.0-hIL-24重组质粒,经鉴定后转染CHO细胞,然后测定CHO培养上清中的rhIL-24的生物学活性。同时以苏州大学医学院细胞和分子生物学教研室构建的pBV220-hIL-24载体为模板,用分别含有BamHI、XhoI酶切位点的hIL-24上、下游引物进行PCR扩增,并将扩增产物用BamHI和XhoI双酶切后与pET-21a(+)质粒连接,构建pET-21a(+)-hIL-24的重组表达质粒,并转化DH5α感受态细胞,PCR鉴定重组子后测序。将测序正确的pET-21a(+)-hIL-24重组质粒抽提后转化BL-21菌株,挑取阳性克隆。振荡培养过夜。接种LA培养基,37℃气浴摇菌至OD600≈0.4~0.6时,加入IPTG,诱导不同时间(2、3、4、5h)后,分别取样。离心取菌体,经反复超声破碎,将包涵体进行洗涤,溶包,复性后透析,获得部分纯化的rhIL-24蛋白,用Western-blot进行鉴定。MTT法评价CHO上清中的rhIL-24及部分纯化的原核表达的rhIL-24蛋白对胃癌细胞SGC7901生长的影响,绘制细胞生长曲线;ELISA法检测原核表达的rhIL-24蛋白刺激PBMC分泌IL-6、TNF-α和IFN-γ的活性;FCM检测rhIL-24对SGC7901细胞周期和凋亡的影响;选用8～9日龄的
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