抗马立克氏病病毒VP22蛋白单克隆抗体的研制及应用

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1马立克氏病CVI988病毒VP22基因克隆与原核表达以感染CVI988/Rispens疫苗株的鸡胚成纤维细胞的DNA为模板,根据Genbank上公布的基因序列设计不同引物,用PCR扩增VP22全基因及不同片段,分别命名为VP22、VP22T、VP22C、VP22H,并将各个基因片段,克隆入pGEX-6P-1中,转化BL21感受态细胞。阳性菌经测序正确后,按1:100比例接种2mL LB液体培养基,过夜培养,再以1:100比例接种10mL 2×YT液体培养基,37℃200rpm摇3 h后,加0.5mM IPTG;诱导5 h后,终止培养,进行SDS-PAGE。结果发现,只有VP22羧基端能够得到高效可溶性表达,命名为VP22C-GST。同时,对表达条件进行优化,发现在不同IPTG工作浓度的诱导下,表达产物均呈高效可溶性表达。将表达产物免疫小鼠获得的多抗进行IFA和Western-blot实验结果表明VP22C-GST有免疫原性,为VP22单抗制备和功能研究奠定了基础。2抗马立克氏病病毒VP22蛋白特异性单克隆抗体的研制及其特性VP22C与GST融合表达产物VP22C-GST经SDS-PAGE,切取特异性条带作为免疫原,经腹腔免疫注射6周龄雄性Balb/c小鼠,0.3mL/只,10天一免。加强免疫3d后,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合。用RB1B病毒感染CEF进行间接免疫荧光试验(IFA)反复筛选阳性克隆,并经有限稀释法3次亚克隆,结果获得了5株特异性分泌抗马立克氏病病毒VP22蛋白的阳性杂交瘤细胞株,分别
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