论文部分内容阅读
背景:肺炎衣原体是社区获得性肺炎的主要致病菌。肺炎衣原体感染是世界普遍性的，文献报告全球成人肺炎衣原体相关抗体血清阳性率达50％～80％。肺炎衣原体原发感染于呼吸道，呼吸道外的慢性感染灶很广，如血管壁、脾、外周血单个核细胞均可受累。许多胞内寄生菌感染中细胞介导的免疫反应在病理形成起作用外还对宿主起一个重要的保护作用。先前的研究表明Th1和Th2免疫反应对肺炎衣原体感染的预后及转归起影响作用。对感染后出现相关严重并发症的研究发现反复和持续病原体感染后宿主体内的炎症反应起了重要的作用，反复感染由于免疫反应的部分保护作用使得宿主体内更难培养出病原菌，同时出现更严重的局部炎症反应。故对肺炎衣原体慢性持续和反复感染与相关感染性疾病发病关系的研究越来越引起人们关注，但目前对再次感染肺炎衣原体的实验研究并不多见。本研究主要从小鼠再次感染肺炎衣原体后出现肺组织病理结构改变及外周循环中免疫状态变化两个方面来讨论。
一、再次感染肺炎衣原体小鼠模型的建立
目的:肺炎衣原体是一种常见的引起呼吸道感染的病原体，通过复制小鼠再次感染肺炎衣原体的动物模型，对肺炎衣原体肺炎重复感染的发病机制进行初步的探讨。
方法:以肺炎衣原体鼻内接种Icr小鼠，间隔42天后再次接种同等量肺炎衣原体包涵体，从再次接种后的不同时间点(再次接种后第1、3、5、7、14、35天)处死动物，观察重复感染后的肺部病理和超微结构改变。
结果:鼻内再次接种肺炎衣原体后，Icr小鼠出现肺部感染，特征性病理改变为早期(7天前)肺实质损伤，见大片肺组织实变。后期(14天后)出现支气管、血管周围慢性炎，以淋巴细胞、浆细胞浸润为主。至35天仅表现为部分肺泡间隔增宽，支气管周少量淋巴细胞、浆细胞浸润。通过电镜观察发现小鼠再次吸入肺炎衣原体第1天即可见肺泡间隔内少量胶原，3～5天急性炎症最重期在间质、支气管腔和肺泡腔可见有明显多形核白细胞浸润，病原体感染肺泡上皮细胞，形成各种发育阶段的肺炎衣原体包涵体。之后急性炎症恢复，但出现明显的慢性炎症表现，特征是肺泡间隔的大量胶原，以及支气管、血管周聚集淋巴细胞、浆细胞等炎性细胞。
结论:Icr小鼠易感肺炎衣原体，再次接种肺炎衣原体小鼠肺组织表现出明显的慢性炎症改变。
二、小鼠再次感染肺炎衣原体免疫状态变化的实验研究
目的:评价小鼠再次感染肺炎衣原体后感染的动态变化过程，了解小鼠血清中Th1型细胞因子(IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4)的变化特征，以及脾细胞中Th1/Th2免疫改变。探讨Th1/Th2细胞介导的免疫反应在肺炎衣原体再次感染病理形成过程中的可能作用。
方法:Icr小鼠通过鼻内重复接种的方法复制肺炎衣原体感染模型，小鼠分别于实验时间点处死(方法同第一部分)。应用流式细胞仪检测脾细胞中Th细胞特征性的细胞因子IFN-γ和IL-4，采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中细胞因子IFN-γ和IL-4。
结果:经肺炎衣原体重复接种后的小鼠脾细胞Th2细胞明显增多，而Th1细胞产生减少。特别是在感染后第5天，Th1仅占CD4+T淋巴细胞比值为1.78±0.96％，明显低于对照组11.00±6.01％(P<0.01)。再次感染肺炎衣原体后第5天小鼠Th1与Th2的比值最低，为0.11。与对照组比较明显朝Th2优势应答(P<0.01)。同时还检测小鼠血清中IFN-γ和IL-4浓度，再次感染早期IFN-γ和IL-4浓度均增高。IFN-γ和IL-4的峰浓度分别是23.40±3.82pg/ml和7.18±0.85pg/ml，均明显高于对照组6.07±2.12pg/ml和2.86±1.82pg/ml(P<0/01)。
结论:小鼠再次感染肺炎衣原体后，脾脏组织获得性免疫以Th2型优势应答的免疫反应为主，而血清中结果提示IFN-γ和IL-4轻度增高。结果表明再次感染肺炎衣原体以Th2优势应答为主，可能在再次感染肺炎衣原体后疾病发生发展过程中起重要作用。