论文部分内容阅读
背景：自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis，AIH)是一种慢性进行性肝脏炎症性疾病，免疫抑制剂能有效地控制病情发展，但如果不能正确诊断、及时有效地治疗，病情进展最终导致肝硬化、肝功能衰竭[1]，因而早期准确诊断是关键。但目前AIH缺少特异性诊断指标，大部分患者的自身靶抗原没有被认识，多数AIH患者只能检测到抗核抗体(anti—nuclear antibody，ANA)或平滑肌抗体(smooth muscle antibody，SMA)，而具有特异性的可溶性肝抗原(soluble liver antigen，SLA)和肝肾微粒体1型(liver kidney—1，LKM—1)抗体阳性率不足AIH患者的20％。自身免疫性肝病患者往往因首先发现肝功能异常而被收入传染病医院。由于AIH患者的临床、病理和实验室的一般特征与病毒性肝炎的自身免疫现象没有显著的差别，致使部分AIH患者的诊断和鉴别诊断比较困难。
人类乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase，ADH)是近年受到关注的AIH可能的靶抗原之一。正常情况下，ADH主要位于细胞浆(占80％～90％)，这些活性的95％分布于肝小叶中心区，主要参与醇类物质的代谢。Ma等[2]通过免疫筛选c DNA表达文库证实ADH是肝脏特异性脂蛋白(Liver—specific membrane lipoprotein，LSP)的抗原成分，在自身免疫性肝病(autoimmune liver disease，AILD)检出率达49％。在AIH患者，抗—ADH抗体与抗—LSP抗体的滴度高度相关，故推测ADH可能是AIH的特异性靶抗原。为探讨ADH抗体在我国AIH和病毒性肝炎患者中的意义，本研究在建立检测方法的基础上对该抗体在各种肝病的检出率进行了分析。
研究目的：本课题旨在建立稳定、特异的间接ELISA方法，检测和分析病人血清中乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase，ADH)抗体并评价血清抗—ADH抗体在诊断AIH中的作用。
材料与方法：用免疫印迹实验对酵母ADH与人血清抗—ADH抗体之间的反应性进行验证；用酵母ADH建立检测血清抗—ADH抗体的ELISA法；用该方法对首都医科大学附属北京佑安医院经临床诊断的67例自身免疫性肝炎、94例原发性胆汁性肝硬化(Primary biliary cirrhosis，PBC)、199例慢性HBV感染者、132例慢性HCV感染者、24例酒精性肝病(Alcohol hepatitis disease，ALD)和北京协和医院经临床确诊的99结缔组织病(connective tissue disease，CTD)患者血清标本中的抗—ADH抗体进行检测并统计其阳性检出率。
结果：Western—Blot证实酵母ADH确实与人血清抗—ADH抗体有反应性；建立了检测人血清ADH抗体的ELISA法；经检测，AIH患者血清ADH抗体阳性率为59.70％，明显高于正常对照组(x2=31.271，P<0.05)、PBC组(x2=54.492，P<0.05)、CHB组(x2=54.848，P<0.05)、CHC组(X2=29.269，P<0.05)、ALD组(x2=8.512，P<0.05)和结缔组织病组(x2=4.229，P<0.05)。抗—ADH抗体诊断AIH灵敏度为59.70％，特异度为85.71％，阳性预测值为37.04％，阴性预测值为93.80％，总的符合率86.82％，误诊率14.30％，漏诊率40.30％。
结论：酵母ADH与人血清抗—ADH抗体有反应；AIH患者血清中ADH抗体的阳性率明显高于PBC、CHB、CHC、ALD和结缔组织病各组。